臨床研究克白靈蘇孜阿甫片有效成分——沒(méi)食子酸含量

    克白靈蘇孜阿甫片主要由蕓香草、紫草、苦艾3味藥材組成，經(jīng)一定的制劑工藝提取后加適量賦形劑研制而成，臨床用于動(dòng)脈硬化、冠心病、肝臟疾病等的治療。由于這3種藥材中均含沒(méi)食子酸，而沒(méi)食子酸的藥理作用與克白靈蘇孜阿甫片的臨床應(yīng)用相關(guān)，故選擇沒(méi)食子酸做為含量測(cè)定指標(biāo)，測(cè)定其中沒(méi)食子酸的含量。在實(shí)驗(yàn)中建立的高效液相測(cè)定法具有簡(jiǎn)便、快速、準(zhǔn)確、重復(fù)性高等特點(diǎn)，可用于該制劑的質(zhì)量控制。 
    
1儀器與試藥 
    Shimadz全自動(dòng)液相色譜儀（紫外檢測(cè)器，LC-2010C系統(tǒng)控制器）；Shimadzu CLASS-VP V6.14 SPl數(shù)據(jù)工作站。 
    
    沒(méi)食子酸對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)：110831-200302），克白靈蘇孜阿甫片3批樣品；甲醇為色譜純，四氫呋喃和磷酸為分析純，水為重蒸餾水。 
   
2方法與結(jié)果 
    2.1 色譜條件 色譜柱（YMC-Pack ODS-A，6.0mm×150 lnln，5um）；流動(dòng)相甲醇-四氫呋喃-磷酸-水（0.5：0.2：0.5：99）；流速0.7 mL•min-1；檢測(cè)波長(zhǎng)270 nm；柱溫35℃；進(jìn)樣量10uL。 
   
2.2溶液的制備 
    2.2.1 對(duì)照品溶液的制備 精密稱(chēng)取沒(méi)食子酸對(duì)照品適量，加流動(dòng)相溶解成每1 mL含沒(méi)食子酸0.208 mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。 
    
    2.2.2供試品溶液的制備 取本品20片，除去包衣，取5 g，精密稱(chēng)定，置100 mL圓底燒瓶中，加2％冰醋酸甲醇溶液50 mL，水浴回流3 h，抽濾，殘?jiān)�用適量甲醇沖洗，濾液揮于，殘?jiān)�加流�?dòng)相，超聲10min溶解并轉(zhuǎn)移至25 mL量瓶中，用流動(dòng)相定容至刻度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。 
    
    2.2.3 陰性樣品溶液的制備 取處方中缺藥材的輔料，依供試品溶液制備方法制備陰性樣品溶液。 
    
    2.3系統(tǒng)適用性實(shí)驗(yàn) 依“2.2.2”項(xiàng)下方法進(jìn)行系統(tǒng)適用性實(shí)驗(yàn)，結(jié)果沒(méi)食子酸理論塔板數(shù)為7340，分離度為2.1，拖尾因子為1.02，均符合藥典規(guī)定。 
    
    2.4專(zhuān)屬性實(shí)驗(yàn)依“2.2”項(xiàng)下方法進(jìn)行制備樣品溶液，依法進(jìn)行測(cè)定，記錄色譜圖。圖譜顯示陰性無(wú)干擾，見(jiàn)圖1（略）。 
    
    2.5線(xiàn)性關(guān)系考察 分別精密量取沒(méi)食子酸對(duì)照品貯備溶液（0.208 mg•mL-1）0.5，1.0，2.0，3.0，4.0 mL置于10 mL量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，即得系列標(biāo)準(zhǔn)溶液，依測(cè)定法進(jìn)行測(cè)定。以對(duì)照品濃度為橫坐標(biāo)，蜂面積為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，回歸方程為：Y=5E+07X-26925，相關(guān)系數(shù)r=0.9998（n=5）。結(jié)果表明，沒(méi)食子酸在10.4～83.2ug•mL-1，峰面積與濃度呈良好的線(xiàn)性關(guān)系。 
    
    2.6檢測(cè)限和定量限的考察 取沒(méi)食子酸對(duì)照品溶液，用流動(dòng)相依次稀釋制成一系列溶液，按信噪比（S／N）為3測(cè)得沒(méi)食子酸檢測(cè)限為80.3 ng•mL-1；按信噪比（S/N）為l0測(cè)得沒(méi)食子酸定量限為250.9ng•mL-1。 
    
    2.7精密度實(shí)驗(yàn) 取同一供試品溶液，依測(cè)定法連流動(dòng)相時(shí)續(xù)進(jìn)樣6次，記錄峰面積，結(jié)果沒(méi)食子酸峰面積RSD0.15％。

    
    2.8重復(fù)性實(shí)驗(yàn)取同一批樣品，平行制備6份，依測(cè)定法進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果沒(méi)食子酸含量RSD 0.89％。 

  
    2.9供試品溶液穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)取供試品溶液在0，2，4，6，8，12，24 h分別進(jìn)樣測(cè)定沒(méi)食子酸含量，考察其24 h內(nèi)穩(wěn)定性。結(jié)果沒(méi)食子酸含量RSD 1.9％，其峰形和含量變化不大，表明溶液在24 h穩(wěn)定。 

 
    2.10加樣回收率實(shí)驗(yàn) 精密稱(chēng)取已知含量的供試品2.5 g，精密稱(chēng)定，共9份，3份為1組，分別加入一定量的沒(méi)食子酸對(duì)照品溶液，依法進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果見(jiàn)表1。（略） 
    
    2.11 3批供試品含量測(cè)定取3批樣品，依法進(jìn)行含量測(cè)定，結(jié)果克白靈蘇孜阿甫片中沒(méi)食子酸的質(zhì)量分?jǐn)?shù)分別為90.5，89.5，88.3ug/片。

3討論 
    本實(shí)驗(yàn)考察了甲醇-四氫呋喃-冰乙酸-水（0.1：0.5：2：97.4）為流動(dòng)相時(shí)，出峰時(shí)間較快，分離度也不好；甲醇-四氫呋喃-0.2％磷酸（0.5：0.5：99）為流動(dòng)相時(shí)，峰較寬。當(dāng)采用甲醇-四氫呋喃-磷酸-水（0.5：0.2：0.5：99）時(shí)沒(méi)食子酸與其相鄰峰的分離度較好，無(wú)拖尾現(xiàn)象，且無(wú)其它峰干擾，操作簡(jiǎn)便實(shí)用。 
    
    實(shí)驗(yàn)過(guò)程中考察了樣品的不同處理方法，采用鹽酸回流處理時(shí)供試品溶液的黏度過(guò)大，無(wú)法準(zhǔn)確定容，沒(méi)食子酸含量偏低，且峰形不好，分離效果差。用甲醇超聲處理樣品時(shí)，峰形較好，但分離效果差，含量較前方法有所提高。用2％冰醋酸甲醇超聲處理樣品時(shí)峰形及分離效果都較好，但供試品溶液顏色過(guò)深，色素含量高，時(shí)間長(zhǎng)會(huì)污染堵塞預(yù)柱篩板，并使柱子壓力升高，且重復(fù)性不好，含量差異大。當(dāng)采用2％冰醋酸甲醇回流處理3 h，殘?jiān)�超聲處�?0min后的供試品溶液峰形及分離效果較好，含量較高而顏色較淺。 
    
    本文采用RP-HPLC法測(cè)定了克白靈蘇孜阿甫片中沒(méi)食子酸的含量，處理方法便捷，測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確可靠，可以作為克白靈蘇孜阿甫片生產(chǎn)過(guò)程的質(zhì)量控制指標(biāo)。

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