臨床研究克白靈蘇孜阿甫片有效成分——沒食子酸含量

    克白靈蘇孜阿甫片主要由蕓香草、紫草、苦艾3味藥材組成，經一定的制劑工藝提取后加適量賦形劑研制而成，臨床用于動脈硬化、冠心病、肝臟疾病等的治療。由于這3種藥材中均含沒食子酸，而沒食子酸的藥理作用與克白靈蘇孜阿甫片的臨床應用相關，故選擇沒食子酸做為含量測定指標，測定其中沒食子酸的含量。在實驗中建立的高效液相測定法具有簡便、快速、準確、重復性高等特點，可用于該制劑的質量控制。 
    
1儀器與試藥 
    Shimadz全自動液相色譜儀（紫外檢測器，LC-2010C系統控制器）；Shimadzu CLASS-VP V6.14 SPl數據工作站。 
    
    沒食子酸對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號：110831-200302），克白靈蘇孜阿甫片3批樣品；甲醇為色譜純，四氫呋喃和磷酸為分析純，水為重蒸餾水。 
   
2方法與結果 
    2.1 色譜條件 色譜柱（YMC-Pack ODS-A，6.0mm×150 lnln，5um）；流動相甲醇-四氫呋喃-磷酸-水（0.5：0.2：0.5：99）；流速0.7 mL•min-1；檢測波長270 nm；柱溫35℃；進樣量10uL。 
   
2.2溶液的制備 
    2.2.1 對照品溶液的制備 精密稱取沒食子酸對照品適量，加流動相溶解成每1 mL含沒食子酸0.208 mg的溶液，作為對照品溶液。 
    
    2.2.2供試品溶液的制備 取本品20片，除去包衣，取5 g，精密稱定，置100 mL圓底燒瓶中，加2％冰醋酸甲醇溶液50 mL，水浴回流3 h，抽濾，殘渣用適量甲醇沖洗，濾液揮于，殘渣加流動相，超聲10min溶解并轉移至25 mL量瓶中，用流動相定容至刻度，搖勻，濾過，取續濾液，即得。 
    
    2.2.3 陰性樣品溶液的制備 取處方中缺藥材的輔料，依供試品溶液制備方法制備陰性樣品溶液。 
    
    2.3系統適用性實驗 依“2.2.2”項下方法進行系統適用性實驗，結果沒食子酸理論塔板數為7340，分離度為2.1，拖尾因子為1.02，均符合藥典規定。 
    
    2.4專屬性實驗依“2.2”項下方法進行制備樣品溶液，依法進行測定，記錄色譜圖。圖譜顯示陰性無干擾，見圖1（略）。 
    
    2.5線性關系考察 分別精密量取沒食子酸對照品貯備溶液（0.208 mg•mL-1）0.5，1.0，2.0，3.0，4.0 mL置于10 mL量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，即得系列標準溶液，依測定法進行測定。以對照品濃度為橫坐標，蜂面積為縱坐標繪制標準曲線，回歸方程為：Y=5E+07X-26925，相關系數r=0.9998（n=5）。結果表明，沒食子酸在10.4～83.2ug•mL-1，峰面積與濃度呈良好的線性關系。 
    
    2.6檢測限和定量限的考察 取沒食子酸對照品溶液，用流動相依次稀釋制成一系列溶液，按信噪比（S／N）為3測得沒食子酸檢測限為80.3 ng•mL-1；按信噪比（S/N）為l0測得沒食子酸定量限為250.9ng•mL-1。 
    
    2.7精密度實驗 取同一供試品溶液，依測定法連流動相時續進樣6次，記錄峰面積，結果沒食子酸峰面積RSD0.15％。

    
    2.8重復性實驗取同一批樣品，平行制備6份，依測定法進行測定，結果沒食子酸含量RSD 0.89％。 

  
    2.9供試品溶液穩定性實驗取供試品溶液在0，2，4，6，8，12，24 h分別進樣測定沒食子酸含量，考察其24 h內穩定性。結果沒食子酸含量RSD 1.9％，其峰形和含量變化不大，表明溶液在24 h穩定。 

 
    2.10加樣回收率實驗 精密稱取已知含量的供試品2.5 g，精密稱定，共9份，3份為1組，分別加入一定量的沒食子酸對照品溶液，依法進行測定，結果見表1。（略） 
    
    2.11 3批供試品含量測定取3批樣品，依法進行含量測定，結果克白靈蘇孜阿甫片中沒食子酸的質量分數分別為90.5，89.5，88.3ug/片。

3討論 
    本實驗考察了甲醇-四氫呋喃-冰乙酸-水（0.1：0.5：2：97.4）為流動相時，出峰時間較快，分離度也不好；甲醇-四氫呋喃-0.2％磷酸（0.5：0.5：99）為流動相時，峰較寬。當采用甲醇-四氫呋喃-磷酸-水（0.5：0.2：0.5：99）時沒食子酸與其相鄰峰的分離度較好，無拖尾現象，且無其它峰干擾，操作簡便實用。 
    
    實驗過程中考察了樣品的不同處理方法，采用鹽酸回流處理時供試品溶液的黏度過大，無法準確定容，沒食子酸含量偏低，且峰形不好，分離效果差。用甲醇超聲處理樣品時，峰形較好，但分離效果差，含量較前方法有所提高。用2％冰醋酸甲醇超聲處理樣品時峰形及分離效果都較好，但供試品溶液顏色過深，色素含量高，時間長會污染堵塞預柱篩板，并使柱子壓力升高，且重復性不好，含量差異大。當采用2％冰醋酸甲醇回流處理3 h，殘渣超聲處理10min后的供試品溶液峰形及分離效果較好，含量較高而顏色較淺。 
    
    本文采用RP-HPLC法測定了克白靈蘇孜阿甫片中沒食子酸的含量，處理方法便捷，測定結果準確可靠，可以作為克白靈蘇孜阿甫片生產過程的質量控制指標。

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