地牡寧神口服液是由熟地黃、枸杞子、山茱萸等11味中藥組成，地牡寧神口服液具有滋補(bǔ)肝腎，寧神益智的作用。原質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)是采用薄層掃描法測(cè)定知母中的拔葜皂苷元的含量，因薄層掃描法專屬性、穩(wěn)定性、重現(xiàn)性均較差，故我們對(duì)其方法進(jìn)行了改進(jìn)。山茱萸具有補(bǔ)益肝腎的作用，其中化學(xué)成分馬錢苷有增強(qiáng)免疫的作用，與地牡寧神口服液的功能主治相吻合，因此我們采用高效液相色譜法測(cè)定地牡寧神口服液中馬錢苷的含量，作為控制地牡寧神口服液的質(zhì)量指標(biāo)。

 
1 儀器與試藥 
    LC-10ATvp高效液相色譜儀（日本島津，SPD-10Avp紫外檢測(cè)器，CLASS—VP色譜工作站），uV-2501型紫外分光光度計(jì)（日本島津），離心機(jī)（Abbott Laboratories，德國(guó)），SD-350H型超聲波清洗器（韓國(guó)）。馬錢苷對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)：111640—200401），地牡寧神口服液為市售樣品（山東煙臺(tái)西苑制藥廠生產(chǎn)），甲醇為色譜純（天津市四友生物醫(yī)學(xué)技術(shù)有限公司，20040426101），甲酸為分析級(jí)（江蘇益林化工廠，980904），水為純化水。

 
2 方法與結(jié)果 
    2.1 色譜條件 
    色譜柱：SHIMADZU Shim-pack vp-ODS（250 mm×4.6mm，5um），預(yù)柱：SHIMADZU Shim-pack vp-ODS（10 mm×4.6 mm，5u m）；流動(dòng)相：甲醇-水-甲酸（30：69：1），檢測(cè)波長(zhǎng)：240 nm，柱溫：30℃ ，流速：1.0 ml•min～，進(jìn)樣量20 ul。

 
    2.2 溶液的制備 
    2.2.1 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取馬錢苷對(duì)照品適量，用50％ 甲醇溶解并稀釋配制成30ug•ml-1的對(duì)照品溶液。 
    2.2.2 供試品溶液的制備 取市售樣品地牡寧神口服液（批號(hào)：20041201）3支（10 ml/支），混勻，精密量取10.0 ml置具塞錐形瓶中蒸干，放冷，精密加入50％ 甲醇25 ml，密塞，稱定重量，超聲15 min，加熱回流1 h，放冷，再稱定重量，用50％ 甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過。精密量取續(xù)濾液10 ml，置中性氧化鋁柱（100～200目，4 g，內(nèi)徑1 cm，干法裝柱）上，用40％ 甲醇50 ml洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘?jiān)��?0％ 甲醇適量使溶解，并轉(zhuǎn)移至10 ml量瓶中，加50％ 甲醇稀釋至刻度，搖勻，過濾，即得。

 
    2.2.3 陰性樣品溶液的制備取地牡寧神口服液（不含山茱萸）10 ml，置具塞錐形瓶中蒸干，按“2.2.2”供試品溶液的制備方法制備陰性樣品溶液。

 
    2.3 專屬性考察 
    在“2.1”色譜條件下，分別吸取陰性樣品溶液、對(duì)照品溶液和供試品溶液各20ul，注入液相色譜儀，記錄色譜圖。可見在與馬錢苷對(duì)照品峰相應(yīng)的位置上，供試品溶液圖中有相應(yīng)的色譜峰，而在陰性樣品溶液色譜圖中相應(yīng)保留時(shí)間處無(wú)此峰，理論板數(shù)按馬錢苷峰計(jì)算應(yīng)不低于3 000。見圖1（略）。 
 
    2.4 線性關(guān)系的考察 
    精密稱取馬錢苷對(duì)照品適量，加50％甲醇使完全溶解，配制成0.256 mg•ml 的對(duì)照品溶液。再加50％ 甲醇配制成0.128，0.064，0.032，0.016，0.008 mg•ml 的對(duì)照品溶液。精密吸取各濃度的對(duì)照品溶液20ul，注入液相色譜儀，測(cè)定峰面積，以峰面積積分值Y為縱坐標(biāo)，馬錢苷對(duì)照品的進(jìn)樣量x為橫坐標(biāo)，經(jīng)線性回歸，回歸方程Y=1.66×10^6X+1.13×10^5，r=0.999 8（n=6），表明馬錢苷進(jìn)樣量在0.16～2.56 g范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

 
    2.5 精密度試驗(yàn) 
    取同一濃度的對(duì)照品溶液（0.032 mg•ml），連續(xù)進(jìn)樣5次，進(jìn)樣量20ul，計(jì)算峰面積的RSD％ =1.3（n=5），結(jié)果表明精密度良好。

 
    2.6 重復(fù)性試驗(yàn) 
    取同一批號(hào)地牡寧神口服液樣品（批號(hào)：040528）5份，按照供試品溶液的制備方法制備供試品溶液，測(cè)定每份的含量，RSD 1.2％（n=5），結(jié)果表明重復(fù)性良好。

  
    2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn) 
    取同一批號(hào)地牡寧神口服液供試品溶液（批號(hào)：040528），分別在0，2，4，6，8，12 h進(jìn)樣測(cè)定馬錢苷峰面積，RSD=1.5％（n=6）。結(jié)果表明制備的供試品溶液在12 h內(nèi)穩(wěn)定。

 
    2.8 加樣回收率試驗(yàn) 
    精密量取已知含量同一批號(hào)地牡寧神口服液的樣品（批號(hào)~040528，馬錢苷含量1.87 m 支）5份，各2.0 ml，分別精密加入馬錢苷對(duì)照品0.30 mg，按供試品溶液的制備方法制備供試液，進(jìn)樣20ul按上述色譜條件測(cè)定，計(jì)算馬錢苷回收率，結(jié)果見表1（略） 
  
    2.9 樣品含量測(cè)定（n=3） 
    取市售樣品地牡寧神口服液（批號(hào)：20050526、20050608、20050620）三個(gè)批號(hào)各3支（10 ml/支），分別混勻，各精密量取10 mll，分別置錐形瓶中蒸干，按照“2.2.2”項(xiàng)中供試品溶液制備方法制備供試品溶液，精密吸取20 l注入液相色譜儀中，每批測(cè)定3次，平均含量分別為1.76，1.85，1.81 m 支。

 
3 討論 
    3.1 質(zhì)量控制方法的改進(jìn) 
    原標(biāo)準(zhǔn)中方法為薄層掃描法測(cè)定知母中的拔葜皂苷元，因薄層掃描法專屬性、穩(wěn)定性、重現(xiàn)性均較差，所以，我們采用高效液相色譜法測(cè)定地牡寧神口服液中馬錢苷的含量做為質(zhì)量控制指標(biāo)。

 
    3.1 波長(zhǎng)的選擇 
    文獻(xiàn)中馬錢苷含量測(cè)定方法中的波長(zhǎng)為236 am，《中國(guó)藥典））2005年版中六味地黃丸測(cè)定馬錢苷的波長(zhǎng)為236am，《中國(guó)藥典））2005年版中山茱萸藥材含量測(cè)定中波長(zhǎng)為240 am。我們?nèi)��?duì)照品溶液適量在紫外可見分光光度儀中掃描，記錄譜圖，從圖中可看出，對(duì)照品溶液在240 nnl處有最大吸收，故擬定馬錢苷的紫外吸收波長(zhǎng)為240 am。

 
    3.2 流動(dòng)相的選擇 
    以甲醇.水（30：70）為流動(dòng)相 ]，試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)樣品色譜圖中馬錢苷峰峰形不佳，經(jīng)過調(diào)整流動(dòng)相的比例，峰形都不佳，最后調(diào)整流動(dòng)相為甲醇.水.甲酸（30：69：1）后，峰形得到改善。

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