紅豆杉膠囊對(duì)雞胚絨毛尿囊膜血管生成的影響

    復(fù)方紅豆杉膠囊是中藥復(fù)方制劑，由紅豆杉、紅參、甘草3味中藥組成，適用于肺癌、胃癌、大腸癌、肝癌、口腔癌等中晚期癌癥的治療，對(duì)放化療有增效作用。復(fù)方紅豆杉膠囊臨床上抗腫瘤作用療效確切，但是否具有抑制腫瘤血管生成的作用，目前尚未見(jiàn)報(bào)道。本研究利用雞胚絨毛尿囊膜法(CAM)觀(guān)察復(fù)方紅豆杉膠囊對(duì)血管生成的影響。 

    藥品與試劑：復(fù)方紅豆杉膠囊；硫酸魚(yú)精蛋白注射液；新潔爾滅；水合氯醛；丙酮；甲醇。 

    方法：含藥血清的制備清潔級(jí)雄性SD大鼠，常規(guī)飼養(yǎng)。復(fù)方紅豆杉膠囊低劑量和高劑量分別按成人(60 kg)體重的6倍(180rag／kg)和I2倍(320 m kg)灌胃給藥，空白血清組大鼠每天灌胃相同體積的蒸餾水。以上各組灌胃1次／d，連續(xù)灌胃7 d。于末次灌胃2h后，水合氯醛麻醉(35 mg／kg)，腹主動(dòng)脈取血，3 000
r／min，10 min離心，取上層血清。無(wú)菌濾器(直徑0．2 btm)過(guò)濾除菌，密封，一20 保存。 

    CAM模型的制備：種蛋的孵育選擇產(chǎn)出2d內(nèi)的新鮮種蛋，先用溫水清洗2次，再用1：1000的新潔爾滅清洗表面，最后在超凈臺(tái)內(nèi)用75％酒精擦拭表面，放入無(wú)菌培養(yǎng)箱孵育，設(shè)定溫度在37~C，濕度在40％ ～60％。雞胚的檢查使用聚光燈源，自制照蛋燈。每天觀(guān)察胚胎發(fā)育情況，隨時(shí)淘汰未受精、死胎及胚胎發(fā)育不良的種蛋。 

    藥物對(duì)CAM的作用隨機(jī)分為生理鹽水組，硫酸魚(yú)精蛋白組，空白血清組，復(fù)方紅豆杉膠囊低高劑量組5組。開(kāi)窗24 h后，超凈臺(tái)內(nèi)揭去透明膠，將滅菌好的擦鏡紙片作為載體放在CAM的血管最少處，每枚種蛋加藥量為10 l，將其輕輕加到載體上。加藥后，用透明膠封閉窗口，標(biāo)記后繼續(xù)孵育。48 h后，記錄雞胚存活率，揭去透明膠，固定液(乙醇： 丙酮i：1)固定，以載體為中心，剪下CAM，水中展開(kāi)后，鋪于濾紙上，拍照，顯微鏡下觀(guān)察血管數(shù)。以載體為中心，1 mill以?xún)?nèi)為一級(jí)血管，5mm內(nèi)為二級(jí)血管，一、二級(jí)血管分別觀(guān)察分析。 

    結(jié)果：復(fù)方紅豆杉膠囊對(duì)雞胚存活率的影響復(fù)方紅豆杉低、高劑量組血清作用于CAM后，對(duì)雞胚的存活率未見(jiàn)明顯影響。 

    生理鹽水組和空白血清組血管生長(zhǎng)正常，硫酸魚(yú)精蛋白組、復(fù)方紅豆杉膠囊低、高劑量組血管計(jì)數(shù)明顯減少，血管顏色蒼白、變淺，載體放置部位無(wú)血管生成。 

    血管生成是指從已存在的血管中長(zhǎng)出新的毛細(xì)血管的過(guò)程。腫瘤的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移都依賴(lài)于新生血管的形成。新生血管為腫瘤的生長(zhǎng)提供營(yíng)養(yǎng)和排出廢物，刺激腫瘤生長(zhǎng)，促使腫瘤向其他組織器官轉(zhuǎn)移。原發(fā)灶血管數(shù)量的增多，增加了腫瘤轉(zhuǎn)移的可能性，即新生血管形成與腫瘤的轉(zhuǎn)移傾向呈正相關(guān)。因此，抑制腫瘤血管生成已成為近年來(lái)控制腫瘤生長(zhǎng)和抗腫瘤轉(zhuǎn)移研究中的熱點(diǎn)之一。 

    復(fù)方紅豆杉膠囊高劑量組 復(fù)方紅豆杉腔囊低劉量翅阻止腫瘤細(xì)胞的增殖。紅參是人參的加工品之一，其主要抗腫瘤成分是人參皂苷。人參皂苷R 可以對(duì)CAM血管生成有顯著的抑制作用 。人參皂苷Rg3聯(lián)合紫杉醇為主化療具有協(xié)同抗腫瘤作用，尤其在穩(wěn)定腫瘤方面優(yōu)勢(shì)明顯 。人參皂苷Rg3可能通過(guò)抑制堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子的產(chǎn)生，以抑制腫瘤血管的生成，也可誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡，抑制腫瘤生長(zhǎng)。 

    復(fù)方紅豆杉膠囊由紅豆杉、紅參、甘草三味中藥組成。紅豆杉的提取物紫杉醇是治療轉(zhuǎn)移性卯巢癌和乳腺癌的有效藥物之一。研究表明紫杉醇對(duì)血管生成有很強(qiáng)的抑制效應(yīng)，證實(shí)紫杉醇是一種血管生成抑制因子 。紫杉醇能夠明顯抑制裸鼠肝癌的血管生成，是一種極其有效的化療藥物。其作用機(jī)理可能是通過(guò)與微量蛋白結(jié)合，促進(jìn)其聚合，抑制細(xì)胞的有絲分裂，有效地配合肺積消1號(hào)方治療老年晚期肺癌32例。復(fù)方紅豆杉膠囊治療肝癌60例臨床研究。結(jié)論復(fù)方紅豆杉膠囊具有明顯的抑制CAM血管生成的作用。 

    (本文節(jié)選自《復(fù)方紅豆杉膠囊對(duì)雞胚絨毛尿囊膜血管生成的影響》)

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