方法: 運(yùn)用MTT法研究靈芝孢子粉水溶性成份在體外對(duì)HepG2細(xì)胞的抑制作用, 并利用裸小鼠的移植瘤模型研究靈芝孢子粉在體內(nèi)對(duì)HepG2細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制作用. HE染色觀察肝癌組織結(jié)構(gòu)和細(xì)胞形態(tài)改變。 

    結(jié)果: TMTT實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明靈芝孢子粉對(duì)HepG2細(xì)胞的IC50值隨作用時(shí)間增加而減小,72 h達(dá)到最低, 為2.14 g/L. 體內(nèi)抑瘤實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示靈芝孢子粉為2000mg/kg時(shí), 對(duì)裸小鼠移植瘤的抑制率為57.0%. 鏡下觀察靈芝孢子粉治療組腫瘤壞死組織較多, 細(xì)胞異型性較小。 

    結(jié)論: 高濃度及高劑量的靈芝孢子粉具有抑制腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)的作用。 

    背景資料：靈芝是擔(dān)子菌綱多孔科靈芝屬真菌, 公認(rèn)為扶正固本, 滋補(bǔ)強(qiáng)壯的傳統(tǒng)中藥. 臨床報(bào)道孢子粉可改善機(jī)體的免疫功能, 防治癌癥, 減輕患者對(duì)放、化療的不良反應(yīng)。 

    靈芝是擔(dān)子菌綱多孔科靈芝屬真菌, 其生長(zhǎng)成熟后所散發(fā)出來(lái)的孢子體即靈芝孢子粉。 靈芝孢子粉富含多糖肽, 有機(jī)鍺, 多種氨基酸, 脂肪酸及微量元素等成份. 臨床報(bào)道孢子粉可改善機(jī)體的免疫功能, 防治癌癥, 減輕患者對(duì)放、化
療的不良反應(yīng)。 以往藥理研究表明, 靈芝孢子粉可增強(qiáng)免疫功能, 并對(duì)多種移植性動(dòng)物腫瘤有明顯的抑制作用[1-3]. 但靈芝孢子粉對(duì)體外培養(yǎng)人癌細(xì)胞的直接作用及人癌裸鼠移植瘤治療作用的研究則較少. 本文報(bào)道靈芝孢子粉體外對(duì)
人肝癌細(xì)胞株HepG2生長(zhǎng)的抑制作用及對(duì)裸小鼠人HepG2移植瘤的抗腫瘤作用的研究。 

    1 材料和方法 

    1.1 材料 HepG2為人肝癌細(xì)胞株 

    1.2 方法 

    1.2.1 體外細(xì)胞毒實(shí)驗(yàn)(MTT法) 

    1.2.2 體內(nèi)抑瘤實(shí)驗(yàn)(人肝癌細(xì)胞HepG2裸鼠移植瘤的生長(zhǎng)抑制實(shí)驗(yàn)): 取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的人肝癌HepG2細(xì)胞, 2.5 g/L胰酶消化后, 用無(wú)血清DMEM配成1×1010 cell/L的單細(xì)胞懸液. 在無(wú)菌條件下接種于裸鼠腋窩皮下, 0.2 mL/只(相當(dāng)于每只裸鼠接種2×106個(gè)腫瘤細(xì)胞)[5]. 接種1 wk后可見腫瘤生長(zhǎng), 當(dāng)腫瘤大小到直徑約為3-4 mm時(shí)(接種10 d以后), 將荷瘤裸鼠按腫瘤大小隨機(jī)分為3組, 每組7-8只裸鼠, 雌雄兼有, (1)空白組:生理鹽水100 mL/kg, ig, 每日給藥; (2)陽(yáng)性對(duì)照組: 5-FU, 用生理鹽水稀釋, 無(wú)菌分裝, 20 mg/kg,i p, 隔日給藥; (3)給藥組: 靈芝孢子粉B, 5 g/LCMC-Na配制, 高壓滅菌, 2000 mg/kg, ig, 每日給藥。 共給藥21 d. 自接種后每日測(cè)量裸鼠體質(zhì)量,每周用游標(biāo)卡尺測(cè)量裸鼠腫瘤的長(zhǎng)(a)短(b)徑,并按以下公式計(jì)算相對(duì)體積. V = 0.5ab2, 各組按時(shí)間點(diǎn)的平均瘤體積作生長(zhǎng)曲線圖. 末次給藥后24 h時(shí)處死動(dòng)物, 剝離腫瘤稱質(zhì)量. 做大體和病理觀察, 部分腫瘤組織用40 g/L多聚甲醛固定,石蠟包埋, 連續(xù)4 μm切片, HE染色, 光鏡下觀察肝癌細(xì)胞壞死, 形態(tài)改變情況。計(jì)算各組抑瘤率,抑瘤率 = (1-用藥組平均瘤質(zhì)量/空白組平均瘤質(zhì)量)×100%, 實(shí)驗(yàn)重復(fù)兩次。統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 用SPSS10.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析, 結(jié)果以mean±SD表示, 用One-Way ANOVA和t -test進(jìn)行分析. 給藥組組間比較用LSD法。 

    2 結(jié)果 

    靈芝孢子粉水溶性成份對(duì)HepG2細(xì)胞的作用 靈芝孢子粉水溶性成份對(duì)HepG2細(xì)胞具有明顯的抑制作用, 隨著時(shí)間延長(zhǎng)和劑量的增加, 對(duì)研發(fā)前沿藥理研究表明, 靈芝孢子粉可增強(qiáng)免疫功能, 并對(duì)多種移植性動(dòng)物腫瘤有明顯的抑制
作用。

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