國產(chǎn)和進(jìn)口他克莫司膠囊的藥代動(dòng)力學(xué)的研究

    他克莫司(tacrolimus，簡稱F~06)是日本藤澤公司1984年從鏈霉菌屬培養(yǎng)物中分離得到的大環(huán)內(nèi)酯類新型免疫抑制劑，現(xiàn)已能全合成。主要藥理作用是能有效抑制T淋巴細(xì)胞激活，與內(nèi)源性細(xì)胞受體結(jié)合，形成一個(gè)親免素復(fù)合物，從而發(fā)揮藥理作用。與環(huán)孢素A(CsA)相比，體內(nèi)外試驗(yàn)證實(shí)他克莫司的免疫活性為CsA的50～100倍 臨床可有效預(yù)防器官移植后急性排斥反應(yīng)，逆轉(zhuǎn)難治性排斥。CsA治療無效者，65％一80％的患者可使用本品治療。目前他克莫司已在肝、腎、心、胰等器官移植中廣泛用于抗排斥及自身免疫系統(tǒng)相關(guān)疾病的治療Ⅲ。本文通過比較國產(chǎn)和進(jìn)口他克莫司膠囊在健康人體的藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)，評價(jià)兩種制劑的生物等效性。 

    本試驗(yàn)中采用的LC—MS／MS法測定受試者體內(nèi)他克莫司血藥濃度。研究發(fā)現(xiàn)，他克莫司在ESI源正離子方式下信號較高，本研究選用M+H1作為MRM掃描方式的母離子，二級碎片掃描時(shí)較高的特征碎片有m／z 768．5和m／z 786．5，選用信號較高的碎片離子ndz 768．5作為子離子進(jìn)行定量，選用ndz 786．5進(jìn)行定性考察或同步考察。流動(dòng)相中加入乙酸銨可以提高質(zhì)譜離子化效率．從而提高信噪比。由于本試驗(yàn)定量限和檢測限較低．研究初期進(jìn)行等度洗脫時(shí)很難達(dá)到目標(biāo)定量限，為了提高信噪比，使用梯度是較為理想的選擇。本研究所選用的色譜柱孔徑和內(nèi)徑均較大，可以達(dá)到較高的流速．在此條件下采用梯度方式進(jìn)行梯度洗脫，可以得到較好的色譜峰，降低梯度延遲效應(yīng)，縮短分析時(shí)間。在梯度洗脫條件下，內(nèi)標(biāo)的選擇相對來說比較容易，內(nèi)標(biāo)選用本研究室現(xiàn)有的對照品曲馬多、地西泮等進(jìn)行考察。試驗(yàn)最初選用曲馬多進(jìn)行試驗(yàn)。峰型和保留時(shí)間均較滿意，但經(jīng)過長時(shí)間進(jìn)樣后發(fā)現(xiàn)內(nèi)標(biāo)曲馬多在試驗(yàn)梯度條件下有柱上累積效應(yīng)。后改用地西泮，結(jié)果較好。

    常見的樣品前處理方案有液一液萃取法、固相萃取法和沉淀蛋白法等，固相萃取法成本較高，液一液萃取法比沉淀蛋白處理繁瑣。本實(shí)驗(yàn)在不影響靈敏度的前提下，采用了極其簡便的沉淀方法，節(jié)省了大量的前處理時(shí)間，提高了工作效率。對于他克莫司全血樣品而言最為關(guān)注的是穩(wěn)定性問題，試驗(yàn)中進(jìn)行了多種穩(wěn)定性考察。發(fā)現(xiàn)全血樣品在冷凍和冷藏條件下均較為穩(wěn)定。但他克莫司在純水或甲醇環(huán)境中易發(fā)生結(jié)構(gòu)轉(zhuǎn)化，因些，試驗(yàn)過程中應(yīng)盡量避免此類情況。全血樣品沉淀蛋白的方法可能會(huì)比較臟，試驗(yàn)中最好將色譜溶劑前沿切入廢液罐，以免造成質(zhì)譜儀的污染。

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