虎眼萬年青多糖對小鼠免疫功能的調節作用

【摘要】目的：依據虎眼萬年青組分中多糖對小鼠巨噬細胞吞噬功能的影響，篩選并優化出60％醇濃度中性多糖活性組分S3，進而研究其對體液免疫、細胞免疫及細胞因子變化的影響，并從細胞和分子水平探討其作用的機理。方法：采用溶血素測定方法，測定 對小鼠脾細胞溶血素抗體的誘導作用；采用 H-TdR滲入法，測定S3對ConA誘導小鼠脾淋巴細胞的增殖作用；采用 H-TdR后標記法，測定S3對NK細胞細胞毒活性的影響；以ELISA法測定S3對小鼠脾細胞]L-2產生的影響；利用流式細胞術，檢測S3對T淋巴細胞亞群CD3、CD4、CD8、CD4／CI~陽性細胞百分率的影響；采用RT-FCR方法檢測L-2 mRNA的表達水平。結果：S3高、中劑量組能明顯增強小鼠脾細胞溶血素抗體的形成(P <O.05)；各劑量組均能明顯增強ConA誘導的淋巴細胞增殖能力(P<O.001)；各劑量組均能增強NK細胞的細胞毒活性并促進]L-2的產生(P <O.001，P<O.01)；高、中劑量組cD8陽性細胞百分率明顯降低(P<O.001)，各劑量組均能顯著地提高CD4／CI~ 陽性細胞百分率(P<O.001)；高劑量組可明顯促進脾細胞中細胞因子]L-2的mRNA表達，使表達量增加(P<O.05)。結論： 具有較強的增強機體多種免疫功能的作用，可利用開發為一種免疫增強藥物。

   近年來研究表明，廣泛存在于動物細胞膜、植物和微生物細胞壁中的多糖類物質能提高機體免疫功能，它不僅能促進T細胞、B細胞、M 細胞等免疫細胞的功能，還能促進細胞因子的生成�；⒀廴f年青(Omithogahm eaudatum Ait，OCA)，俗稱珍珠草，為百合科、虎眼萬年青屬、有尾種多年生草本植物。從同屬虎眼萬年青中分離出的皂甙OSW-1對肺癌、乳腺癌有明顯的抗癌活性。體外抗P338淋巴細胞白血病活性結果表明，OSW-1是常見抗癌藥物喜樹堿、阿霉素 紫杉醇抗癌活性的10~100倍，并已由Deng等人首次合成。我們對虎眼萬年青不同成分進行了體外抑瘤實驗，發現總生物堿、總皂甙、總多糖對多種瘤株均顯示出不同程度的抑制作用。為了進一步了解多糖抑瘤的作用機理，我們首先通過非特異性免疫功能試驗，篩選出具有顯著提高小鼠巨噬細胞吞噬功能的活性組分——60％醇濃度的中性多糖(S3)。本文進一步對S3在小鼠體液免疫、細胞免疫的調節作用進行了研究，同時，通過流式細胞術客觀地對T淋巴細胞亞群的變化進行了檢測，并利用RT-PCR方法檢測了s3對脾細胞中細胞因子IL-2 mRNA表達水平的影響，從細胞和分子水平對其免疫調節作用機制進行了研究。

實驗經過（略）

討論
    多糖類化合物主要是依賴于對免疫功能具有較強的調節作用，從而表現出具有一定的抗衰老、抗病毒和抗腫瘤的作用。本項研究首次表明，60％醇濃度的虎眼萬年青中性多糖活性組分s3在促進巨噬細胞吞噬功能的非特異性免疫活性的基礎上，使巨噬細胞處理和傳遞抗原的能力增強，提高了抗體的水平。同時，還能增強小鼠T、B淋巴細胞的轉化、提高NK細胞細胞毒活性、促進小鼠脾細胞產生白細胞介素2(IL廣2)。IL-2是促進細胞毒T細胞(CTL)和自然殺傷細胞(NK)細胞的增殖與分化的重要調控因子。S3促進T細胞的增殖反應和11_,-2的分泌。有利于增強細胞毒T細胞和NK細胞的殺瘤效應。T淋巴細胞亞群是構成機體免疫防御系統的重要因素。T淋巴細胞中輔助性T細胞CIM 和抑制性T細胞CD8兩個主要亞群，這兩類細胞相互變化、調整可以維持機體內的免疫平衡。CIM具有調節免疫反應的活性，輔助B細胞產生抗體，分泌細胞因子的作用，而CD8則有免疫抑制和細胞毒性的作用。S3能不同程度地使CD3、CIM、CD4／CD8升高，而使CD8下降，進一步證實了S3對輔助性T細胞(Th)的增強作用及對抑制性T細胞(Ts)的降低作用，推測輔助性T細胞(1h)可能是其主要的原發刺激細胞。不同濃度S3能在一定程度上促進IL-2的mRNA表達量，從基因水平上又進一步證實了S3對IL-2生成的影響，推斷S3有促進小鼠免疫功能的作用。

    本研究結果從非特異性免疫、體液免疫和細胞免疫的角度，較全面地研究了s3對機體的免疫增強作用和對免疫應答的調節作用。同時，從分子及基因水平較全面地研究了s3的免疫增強作用，結合對該組分的分離鑒定工作，對其作用機制進行更加深入的研究，不僅有助于進一步說明s3的免疫調節作用機制，而且對進一步開發利用這一天然藥物也具有實驗意義。

參考文獻 （略）

石磊 譚巖 劉志強 劉淑瑩 (中國科學院長春應用化學研究所新藥研究室，長春130022)

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