高效液相色譜法測定琥珀安神丸中五味子醇甲的含量

    琥珀安神丸是由地黃、當歸、五味子、柏子仁等十八味藥材組成的復方制劑，原質量標準收載于《衛生部藥品標準中藥成方制劑第十三冊》，五味子為方中主藥，具有收斂固澀，益氣生津，補腎寧心的功能。用于久嗽虛喘，夢遺滑精，遺尿尿頻，久瀉不止，自汗，盜汗，津傷口渴，短氣脈虛，內熱消渴，心悸失眠等病癥，與本品的功能主治有密切關系。原標準中沒有含量測定的方法，為了更有效地控制該制劑的內在質量，本實驗選用反相高效液相色譜法測定五味子藥材中五味子醇甲的含量，具有操作簡便，合理、重現性好的特點，可作為控制琥珀安神丸內在質量的定量指標。

    1儀器與試藥

    日本島津LC-2010AHT高效液相色譜儀；紫外檢測器；島津UV-2450紫外分光光度計；KQ-100型超聲波清洗器；五味子醇甲對照品（批號171242-200404購自中國藥品生物制品檢驗所）；甲醇為色譜純，水為純化水，其他試劑均為分析純；琥珀安神丸（吉林省某藥業生產）。

    2方法

    2.1對照品溶液的制備精密稱取五味子醇甲對照品適量，加甲醇制成每1ml含11.02μg的溶液。

    2.2供試品溶液的制備取本品（批號20060201）重量差異項下的大蜜丸，剪成長約5mm的碎條，取5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇25ml，稱定重量，超聲處理40min，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過。精密量取續濾液2ml，置中性氧化鋁柱（100～200目，1.5g，內徑1cm）上，用50％甲醇洗脫，收集洗脫液約9ml，置10ml量瓶中，加50％甲醇至刻度，搖勻，即得。

    2.3色譜條件

    2.3.1測定波長的選擇取對照品溶液，依法用島津UV-2450紫外分光光度計在200～400nm范圍內進行掃描，結果五味子醇甲在250nm波長處有最大吸收，故選擇250nm為本實驗的測定波長。

    2.3.2系統適用性實驗分別采用色譜柱：（1）漢邦C18（4.6mm×250mm，5μm）；（2）迪馬鉆石C18（4.6mm×250mm，5μm），以甲醇-水（65∶35）為流動相，檢測波長為250nm，柱溫30℃。精密吸取對照品溶液10μl，供試品溶液20μl分別注入液相色譜內，測得對照品與供試品的五味子醇甲色譜峰的理論板數分別為：（1）8537，9515；（2）5821，7734.由此確定合理的理論板數，理論板數按鹽酸麻黃堿色譜峰計算應不低于3000.

    2.4方法學考察

    2.4.1標準曲線制備精密吸取對照品溶液2、4、6、8、10μl，分別注入液相色譜儀，以進樣量為橫坐標，以峰面積為縱坐標，繪制標準曲線，計算回歸方程為Y=-257.2＋2580880X（r=1.0000）結果表明五味子醇甲在0.02204～0.1102μg范圍內，呈良好的線性關系。

    2.4.2陰性對照實驗按供試品溶液制備方法，制成不含五味子藥材的陰性對照溶液。吸取該溶液20μl，注入液相色譜內，依法測定結果，在與五味子醇甲色譜峰相應的保留時間附近無干擾峰出現。

    2.4.3穩定性實驗取同一供試品溶液，在0、5、10、15、20h，分別進樣20μl，按五味子醇甲色譜峰面積計，峰面積平均值為230502，RSD為1.2%.結果表明20h內供試品中的五味子醇甲的含量穩定。

    2.4.4精密度實驗取同一供試品溶液20μl，重復進樣6次，測得五味子醇甲色譜峰面積的平均值為235940，RSD=1.0%.測定結果表明該方法精密度良好。

    2.4.5重現性實驗取同一供試品，按供試品溶液制備方法，平行制備6份，對照品溶液進樣10μl，供試品溶液進樣20μl，依法測得樣品中五味子醇甲含量的平均值為0.122（mg/g），RSD=1.5%，表明該方法重現性良好。

    2.4.6回收率實驗精密稱取經同法測定，已知含量的供試品2.5g（批號為20060201，含量為0.112mg/g）6份，分別精密加入新配制的五味子醇甲對照品溶液（12.92μg/ml）25ml，按供試品溶液的制備方法制備，對照品溶液進樣10μl，供試品溶液進樣20μl，依法測定，計算回收率，五味子醇甲的平均回收率為98.0％，RSD=0.9％。結果表明本方法準確可行。

   2.4.7樣品測定結果取5批琥珀安神丸樣品，分別按供試品溶液制備方法制備。對照品溶液進樣10μl，供試品溶液進樣20μl，每批測定2次，五味子醇甲的平均含量見表1.表1樣品測定結果

    3討論

    在供試品溶液的制備過程中，首先對加入溶劑的量進行了實驗，取供試品5g，2份，分別加入5倍量和10倍量的甲醇，依本文所述的方法處理并依法測定，結果基本一致。但是加入10倍量甲醇的供試品中的五味子醇甲色譜峰面積大小，與對照品色譜峰的峰面積相差過大，會影響結果的準確性，因此選用5倍量為好。另外在制備供試品溶液時，還對是否用中性氧化鋁柱處理進行了實驗，首先選用供試品加溶劑超聲處理，濾過后直接上樣的方法，然后再用本文所述的上中性氧化鋁柱的方法，兩者所測得的結果基本一致，但未經中性氧化鋁柱處理的供試品，色譜圖上顯示雜質多，并在五味子醇甲色譜峰附近有雜質峰干擾，會影響結果的準確性，因此選用了上中性氧化鋁柱的方法。

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