蛋白酪氨酸激酶--前景光明的抗腫瘤靶點(diǎn)

      癌癥極大威脅人類(lèi)健康，抗腫瘤研究是當(dāng)今生命科學(xué)中極富挑戰(zhàn)性且意義重大的領(lǐng)域。目前，臨床上常用的抗腫瘤藥物主要是細(xì)胞毒類(lèi)藥物，這類(lèi)抗癌藥具有難以避免的選擇性差、毒副作用強(qiáng)、易產(chǎn)生耐藥等缺點(diǎn)。近年來(lái)，隨著生命科學(xué)研究的飛速進(jìn)展，惡性腫瘤細(xì)胞內(nèi)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、細(xì)胞周期的調(diào)、細(xì)胞凋亡的誘導(dǎo)、血管生成以及細(xì)胞與胞外基質(zhì)的相互作用等各種基本過(guò)程正在被逐步闡明。以一些與腫瘤細(xì)胞分化增殖相關(guān)的細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的關(guān)鍵酶作為藥物篩選靶點(diǎn)，發(fā)現(xiàn)選擇性作用于特定靶點(diǎn)的高效、低毒、特異性強(qiáng)的新型抗癌藥物已成為當(dāng)今抗腫瘤藥物研究開(kāi)發(fā)的重要方向。
      蛋白酪氨酸激酶是一類(lèi)具有酪氨酸激酶活性的蛋白質(zhì)，可分為受體型和非受體型兩種，它們能催化ATP上的磷酸基轉(zhuǎn)移到許多重要蛋白質(zhì)的酪氨酸殘基上，使其發(fā)生磷酸化。蛋白酪氨酸激酶在細(xì)胞內(nèi)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路中占據(jù)了十分重要的地位，調(diào)節(jié)著細(xì)胞體內(nèi)生長(zhǎng)、分化、死亡等一系列生理化過(guò)程。
      蛋白酪氨酸激酶功能的失調(diào)則會(huì)引發(fā)生物體內(nèi)的一系列疾病。已有的資料表明，超過(guò)50%的原癌基因和癌基因產(chǎn)物都具有蛋白酪氨酸激酶活性，它們的異常表達(dá)將導(dǎo)致細(xì)胞增殖調(diào)節(jié)發(fā)生紊亂，進(jìn)而導(dǎo)致腫瘤發(fā)生。此外，酪氨酸基酶的異常表達(dá)還與腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移，腫瘤新生血管的生成，腫瘤的化療抗性密切相關(guān)。因此，以酪氨酸激酶為靶點(diǎn)進(jìn)行藥物研發(fā)成為國(guó)際上抗腫瘤藥物研究的熱點(diǎn)，為此投入的研究經(jīng)費(fèi)也是其它任何一個(gè)非傳統(tǒng)的腫瘤靶點(diǎn)所無(wú)法匹敵的。
     目前為止，已有十多種蛋白酪氨酸激酶抑制劑和抗體進(jìn)入I-Ⅱ期臨床試驗(yàn)階段，個(gè)別的已經(jīng)上市，并取得了令人鼓舞的治療結(jié)果。基中，Genentech公司和羅氏藥廠聯(lián)合研究和生產(chǎn)的HerceptinTM(Trastuzumab)是一種抗酪氨酸激酶受體HER2/neu的人源化的單克隆抗體。1998年，美國(guó)食品的藥物管理局（Food and Drug Administration, FDA）正式批準(zhǔn)Herceptin用于治療某些HER2陽(yáng)性的轉(zhuǎn)移性乳腺癌。2001年5月，N ovartis公司研發(fā)的針對(duì)酪氨酸激酶Bcr-Abl的抑制劑GleevecTM (imatinib mesylate)由于對(duì)治療慢性髓樣白血病（chronic myelogenous leukemia,CML）具有非常好的療效，尚未完成Ⅲ期臨床就被FDA批準(zhǔn)提前上市，用于治療費(fèi)城染色體呈陽(yáng)性（Philadelphia chromosome – positive, Ph+）的慢性髓樣白血病患者，引起了巨大的轟動(dòng)。GleevecTM是第一個(gè)在了解癌癥的病因后鴿是設(shè)計(jì)開(kāi)發(fā)，并取得了顯著成效和的腫瘤治療藥物，它的研發(fā)成功可以說(shuō)是癌癥治療的一個(gè)里程碑。這一重大成就被美國(guó)《科學(xué)》雜志列入2001年度十大科技新聞。紐約《時(shí)代》雜志將其作為雜志的封面，稱(chēng)GleevecTM 開(kāi)創(chuàng)了藥物研發(fā)的新時(shí)代。2002年2月，美國(guó)FDA又批準(zhǔn)GleevecTM 用于胃腸基質(zhì)瘤（gastrointestinal stromal tumors, GLST）的治療。2002年7月，AstraZeneca公司研發(fā)的IressaTM (ZD1839又被美國(guó)FDA批準(zhǔn)用于治療經(jīng)過(guò)標(biāo)準(zhǔn)含鉑類(lèi)方案和紫杉萜化療后仍然繼續(xù)惡化的終未期非小細(xì)胞肺癌患者，這也是第一種用于實(shí)體瘤治療的針對(duì)特定靶點(diǎn)挑戰(zhàn)分子酪氨酸激酶抑制劑。
      erceptin，Gleevec以及Iressa的上市進(jìn)一步證明了以特定靶點(diǎn)尤其是以酪氨酸激酶為靶點(diǎn)進(jìn)行抗腫瘤藥物的研發(fā)是21世紀(jì)最有可能獲得突破性進(jìn)展的抗腫瘤藥物領(lǐng)域，具有十分廣闊的前景。本文將就酪氨酸激酶在腫瘤發(fā)生發(fā)展中的作用，以及靶向于酪氨酸激酶的小分子抑制劑及抗體研發(fā)的最新進(jìn)展做一終述。

      目前至少已有近六十種分屬20個(gè)家族的受體酪氨酸激酶被子識(shí)別。所有受體酷氨酸激酶都屬于I型膜蛋白，其分子具有相似的拓樸結(jié)構(gòu)：糖基化的胞外配體結(jié)合區(qū)，疏水的單次跨膜區(qū)，以及胞內(nèi)的酪氨酸激酶催化結(jié)構(gòu)域及調(diào)控序列。不同受體酪氨酸激酶結(jié)合，將導(dǎo)致受體發(fā)生三聚化，并進(jìn)一步使受體胞內(nèi)區(qū)特異的受體酪氨酸殘基發(fā)生自身磷酸化或交叉磷酸化，從而激活下游的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路。許多腫瘤的發(fā)生、發(fā)展都與酪氨酸激酶的異常表達(dá)有著極其密切的聯(lián)系，下面將對(duì)幾類(lèi)與腫瘤的發(fā)生發(fā)展最為密切的受體酪氨酸激酶的研究迸展做一簡(jiǎn)介。

一、 表皮生長(zhǎng)因子受體（Epidermal grovth factor receptor, EGFR）家族
      EGFRPE包括EGFR、ErbB2、ErbB4等4個(gè)成員，其家族受體酪氨酸激酶（RTK）以
單體形式存在，在結(jié)構(gòu)上由胞外區(qū)、跨膜區(qū)、胞內(nèi)區(qū)3個(gè)部分組成，胞外區(qū)具有2個(gè)半氨酸豐富區(qū)，胞內(nèi)區(qū)有典型的ATP結(jié)合位點(diǎn)和酪氨酸激酶區(qū)，其酪氨酸激酶活性在調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖及分化中起著至關(guān)重要的作用。

      人的egfr基因定位于第7號(hào)染色體的短臂（7p12.3-p12.1），它編碼的產(chǎn)物EGFR由1210個(gè)氨基酸組成，蛋白分子量約為170kDa，其中，712-979位屬于酪氨酸激酶區(qū)。EGFR的專(zhuān)一配體有EGF、TGF、amphiregulin,與其他EGFR家庭成員 共有的配體有（cellulin(BTC)、heparin-binding EGF(HB-EGF)、Epiregulin(EPR) ）等。
      EGFR在許多上皮業(yè)源的腫瘤細(xì)胞中表達(dá)，如非小細(xì)胞性肺癌，乳腺癌、頭頸癌，膀胱癌，胃癌，前列腺癌，卵巢癌、膠質(zhì)細(xì)胞瘤等。另外，在一些腫瘤如惡性膠質(zhì)瘤、非小細(xì)胞性肺癌、乳腺癌、兒童膠質(zhì)瘤、成神經(jīng)管細(xì)胞瘤及卵巢癌等中還可檢測(cè)到EGFR缺失。最為常見(jiàn)的EGFR缺失突變型是EGFRⅧ，EGFRⅧ失去了配體結(jié)合區(qū)，但是可自身活化酪氨酸激酶，刺激下游信號(hào)通路的激活，而不依賴(lài)于與其配全結(jié)合。
      EGFR在許多腫瘤中的過(guò)表達(dá)和/或突變，借助信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)至細(xì)胞生長(zhǎng)失控和惡性化。另外，EGFR的異常表達(dá)還與新生血管生成，腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移，腫瘤的化療抗性及預(yù)后密切相關(guān)。EGFR高表達(dá)的腫瘤患者，腫瘤惡性程度高，易發(fā)生轉(zhuǎn)移，復(fù)發(fā)間期短，復(fù)發(fā)率高，患者的存活期短。
ErbB2，又名HER-2/neu，是EGFR家族的第二號(hào)成員，ErbB2通過(guò)與EGFR家族中其它三位成員構(gòu)成異源二聚體，而發(fā)揮生物學(xué)作用，尚未發(fā)現(xiàn)能與其直接結(jié)合的配體。編碼ErbB2的基因neu最早從大鼠神經(jīng)母細(xì)胞瘤中分離得到，人類(lèi)體細(xì)胞內(nèi)neu基因的同源基因，又稱(chēng)為HER-2或erbB2，位于人第17號(hào)染色體的長(zhǎng)臂（17q21.1），它編碼的產(chǎn)物ErbB2由1255個(gè)氨基酸組成，蛋白分子量約為185Kda，其中，720-987位屬于酪氨酸激酶區(qū)。
      ErbB2通常只在胎兒時(shí)期表達(dá)，成年以后只在極少數(shù)組織內(nèi)低水平表達(dá)。然而在多種人類(lèi)腫瘤中卻過(guò)度表達(dá)，如乳腺癌（25-30%）、卵巢癌（25-32%、肺靜癌（30-35%）、原發(fā)性腎細(xì)胞癌（30-40%）等。過(guò)度表達(dá)的原因主要是ErbB2基因擴(kuò)增（95%）或轉(zhuǎn)錄增多（5%）。
1987年，Slamon等人首行先報(bào)道了ErbB2擴(kuò)增和乳腺癌臨床預(yù)后不良之間的顯著關(guān)系，其顯著性高于雌激素、孕激素等指標(biāo)，并在以后的研究中得到大量證實(shí)。隨后，ErbB2表達(dá)水平和乳腺癌治療效果間的關(guān)系得到廣泛研究，人們發(fā)現(xiàn)ErbB2高表達(dá)乳腺癌患者對(duì)他莫昔芬（tamoxifen）治療、單獨(dú)的激素療法、以及環(huán)磷酰胺、甲氨喋呤、5-氟脲嘧啶聯(lián)合化療產(chǎn)生耐受。研究還表明，ErbB2在細(xì)胞的惡性轉(zhuǎn)化中發(fā)揮重要作用，并能促進(jìn)惡性腫瘤轉(zhuǎn)移。ErbB2受體過(guò)度表達(dá)往往提示乳腺癌惡性程度高，轉(zhuǎn)移潛力強(qiáng)，進(jìn)展迅速，化療緩解期短，易產(chǎn)生化療和激素治療抗性，生存率和生存期短，復(fù)發(fā)率高。
      和ErbB4對(duì)腫瘤的作用目前尚不清楚，但在腫瘤形成模型的臨床前研究發(fā)現(xiàn)，ErbB3、Erb3與EGFR、ErbB2共表達(dá)后會(huì)使腫瘤惡性程度明顯增加。

二、 血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體（Vascular endothelial growth factor receptor, VEGFR）家族
      VEGFR家族的成員包括：VEGFR1（Flt-1）、VEGFR2（KDR/Flk-1）、VEGFR3（Flt-4）,這一家族的受體在細(xì)胞外存在著7個(gè)免疫球蛋白樣的結(jié)構(gòu)域，在胞內(nèi)酪氨酸激酶區(qū)則含有一段親水手插入序列。
      VEGFR1位于人第13號(hào)染色體的長(zhǎng)臂（13q12），由1338個(gè)氨基酸組成，827-1158位屬于酪氨酸激酶區(qū)。VEGFR2位于第13號(hào)染色體的長(zhǎng)臂（4q12），由1356個(gè)氨基酸組成，845-1173位屬于酪氨酸激酶區(qū)。VEGFR3位于第5號(hào)染色體的長(zhǎng)臂（5q35.5），由1298個(gè)氨基酸組成，845-1173位屬于酪氨酸激酶區(qū)。
      Flt-1的配體有VEGFR121，VEGFR165，VEGF-B，PIGF；KDR/Flk-1的配體有VEGFR121，VEGFR145，VEGFR165，VEGF-C，VEGF-D；Flk-4的配體有VEGF-C，VEGF-D。這些配體都屬于血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（Vascular Endothelial Grovth Factr, VEGF） 超家族，其中VEGFR121，VEGFR145，VEGFR165是VEGF-A（即通常所指的VEGF）經(jīng)不同剪切形成的不同的多肽形式，VEGFR165又是主要作用形式，與VEGF的生物學(xué)活性密切相關(guān)。
      在實(shí)體瘤的惡性生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移中，腫瘤的新生血管生成起著非常重要的作用，它為腫瘤的生長(zhǎng)提供了所必需的營(yíng)養(yǎng)和氧氣。VEGF作為已知最強(qiáng)的血管滲透劑和內(nèi)皮細(xì)胞特異的有絲分裂源，在內(nèi)皮細(xì)胞的增殖、遷移和血管構(gòu)建中起著重要的作用。它的表達(dá)水平和腫瘤組織的血管化程度及惡性程度呈現(xiàn)明顯的正相關(guān)。VEGF主要是通過(guò)作用于血管內(nèi)皮細(xì)胞上高親和力的受體Flk-1和KDR/Flk-1而發(fā)揮其生物學(xué)作用的，兩者具有不同信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑。其中KDR/Flk-1在介導(dǎo)VEGF的生物效應(yīng)中最為重要，與細(xì)胞趨化性、細(xì)胞的分裂、肌動(dòng)蛋白重組密切相關(guān)。Flk-1雖然與VEGF結(jié)合的親和力更強(qiáng)，而且磷酸化作用也相似，但對(duì)細(xì)胞的促分裂作用卻小得多。基因剔除小鼠的研究發(fā)現(xiàn)，在KDR/Flk-1缺失的小鼠中，內(nèi)皮細(xì)胞無(wú)法生成，從而使血管島，血管的開(kāi)成無(wú)法進(jìn)行；而在Flk-1缺失的小鼠中，內(nèi)皮細(xì)胞可以生成，但是內(nèi)皮細(xì)胞排列形成血管管腔的過(guò)程受到了抑制。
      Flk-4高度表達(dá)于胚胎血管發(fā)生時(shí)的血管母細(xì)胞、靜脈和淋巴管，但是在發(fā)育到胎兒以后，F(xiàn)lk-4僅在淋巴內(nèi)皮細(xì)胞表達(dá)。在多種腫瘤的病程中，F(xiàn)lk-4介導(dǎo)了VEGF-C，VEGF-D的生物學(xué)效應(yīng)，誘導(dǎo)腫瘤淋巴管形成，促進(jìn)腫瘤淋巴侵入和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。此外，F(xiàn)lk-4缺失的小鼠中，務(wù)砭和新生血管可以生成，但是由于血管管腔的缺乏，使得一些較大的血管無(wú)法規(guī)則地排列，這一結(jié)果提示，F(xiàn)lk-4在新生血管生成中發(fā)揮了重要的作用。

三、 血小板衍生生長(zhǎng)因子受體（Platelet-derived growth factor receptor, PDGFR）家族
      PDGFR家族的成員除了PDGFRα和PDGFRβ這外，還包括集落刺激因子1受體（Colony
stimulating factor-1receptor, CSF-1R）、干細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體（Stem cell factor receptor, SCFR/KIT）、FLK2/FLT3。這一家族的受體在細(xì)胞外存在著5個(gè)免疫球蛋白樣的結(jié)構(gòu)域，在胞內(nèi)酪氨酸激酶區(qū)則含有一段親水插入序列。
      PDGFRα位于人第4號(hào)染色體的長(zhǎng)臂（4q12）,由1089個(gè)氨基酸組成，593-954位屬于
酪氨酸激酶區(qū)。PDGFRβ位于人第5號(hào)染色體的長(zhǎng)臂（5q3-q32），由1106個(gè)氨基酸組成，600-962位屬于酪氨酸激酶區(qū)。
      PDGFRα、PDGFRβ的配體為血小板衍生生長(zhǎng)因子PDGF，功能性的PDGF是由A鏈和B鏈通過(guò)二硫鍵連接成的二聚體，包括：PDGF-AA、PDGF-BB和PDGF-AB。PDGFRAA只能與受體二聚體PDGFRαα結(jié)合；PDGF-AB可以與PDGFRαα和PDGFRαβ結(jié)合；而PDGFR-BB與PDGFRαα、PDGFRαβ、PDGFRββ三種PDGFRα二聚體類(lèi)型都能結(jié)合。
      PDGFR主要存在于成纖維細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞中，但也同時(shí)在腎、睪丸、腦中表達(dá)。PDGFR與腫瘤發(fā)生有密切的關(guān)系，在大多數(shù)膠質(zhì)母細(xì)胞瘤中，存在著PDGF及其受體形成的自分泌環(huán)路，這一環(huán)路與腫瘤的發(fā)生，發(fā)展有著極其密切的關(guān)系。另外，相似的環(huán)路也在黑色素瘤、腦膜瘤、神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤、卵巢癌、前列腺癌、肺癌和胰腺癌中存在。此外，PDGFR的酪氨酸激酶區(qū)和Tel基因發(fā)生T（5：12）染色體易位，形成融合蛋白Tel-PDGFR，在慢性粒單核細(xì)胞白血病患者的細(xì)胞中大量表達(dá)。
      KIT/SCFR位于人第4號(hào)染色體的長(zhǎng)臂（4q12），由976個(gè)氨基酸組成，589-937位屬于蛋白激酶區(qū)。干細(xì)胞生長(zhǎng)因子（Stem cell factor, SCF）是KIT/SCFR的配體。KIT/SCFR與機(jī)體的造血功能，肥大細(xì)胞的發(fā)育，黑素生成，配子形成以及Cajal間質(zhì)細(xì)胞的發(fā)育密切相關(guān)。
      研究發(fā)現(xiàn)，KIT/SCFR存在著30多種功能獲得性（gain-of-function, GOF）突變形式，它們是許多腫瘤發(fā)生、發(fā)展的直接誘因。在大多數(shù)胃腸道基質(zhì)瘤（gastrointestinal stronal tumor, GIST）患者中，c-kit基因在近膜區(qū)（外顯子11）發(fā)生了GOF點(diǎn)突變，使得KIT/SCFR結(jié)構(gòu)性地激活；促進(jìn)了腫瘤的生長(zhǎng)；c-kit基因在激酶區(qū)（外顯17）的GOF 點(diǎn)突變與肥大細(xì)胞白血病，無(wú)性細(xì)胞瘤的發(fā)生密切相關(guān)；c-kit基因的GOF點(diǎn)突變及及部分基因缺失還與急性髓樣白血病（acute myeloid leukemia）的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。此外，在70%的小細(xì)胞肺癌患者中存在著SCF及KIT/SCFR自分泌環(huán)路，這一環(huán)路的存在有利于腫瘤不依賴(lài)于生長(zhǎng)因子的生長(zhǎng)。
FLK2/FLT3位于人第13號(hào)染色體的長(zhǎng)臂（13q12）,由993個(gè)氨基酸組成，610-943位屬于蛋白激酶區(qū)。FL是FLK2/FLT3的配體。FLK2/FLT3主要表達(dá)于未成熟的造血細(xì)胞、胎盤(pán)及腦中，與其他造血生長(zhǎng)因子協(xié)同作用，共同維持干細(xì)胞、祖細(xì)胞以及抗原遞呈細(xì)胞DC、自然殺傷細(xì)胞的生長(zhǎng)。研究發(fā)現(xiàn)，約1/3的急性粒細(xì)胞白血病（acute myeloblastic leukaemias）患者聯(lián)重復(fù)序列發(fā)生突變，使近膜區(qū)的長(zhǎng)度出現(xiàn)多態(tài)性，引起FLK2/FLT3酪氨酸激酶不依賴(lài)配體持續(xù)活化，它可能性與其它染色體易位協(xié)同作用。共同促進(jìn)白血病的發(fā)生。

四、 成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子受（Fibroblast growth factor receptor, FGFR）
      FGFR家族成員包括FGFR1（flg）、FGFR2（bek）、FGF3R、FGFR4。這一家族的受體
在細(xì)胞外存在著3個(gè)免疫球蛋白樣的結(jié)構(gòu)域和一段酸性殘基序列，在胞內(nèi)酷氨酸激酶區(qū)則含有一段親水插入序列。
      FGFR的配體為成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子。FGF只有在輔助分子肝素硫酸糖蛋白（heparin sulfate proteoglycan, HSPG）的協(xié)同作用下，才能與FGFR作用。FGF與FGFR以2：2：2的比例形成二聚體，每個(gè)FGF與其中一個(gè)受全的D2、D3區(qū)相互作用的同時(shí)，還與另一受體的D2區(qū)結(jié)合，以促進(jìn)配受體復(fù)合物的穩(wěn)定。
      FGFs主要由中胚層來(lái)源的細(xì)胞產(chǎn)生，有強(qiáng)烈促增殖和分化作用，對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞、血管平滑肌細(xì)胞、成纖維細(xì)胞等均有很強(qiáng)的促有絲分裂作用。體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)均表明它具有促血管生成的作用。FGF在血管生成的作用包括：（1）促過(guò)血管內(nèi)皮細(xì)胞的增殖和遷移；（2）加速具有降解基底膜作用的蛋白激酶釋放；（3）促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞形成管狀結(jié)構(gòu)。另外，F(xiàn)GF還與腫瘤細(xì)胞的遷移有關(guān)。FGFRs在內(nèi)皮細(xì)胞和多種腫瘤細(xì)胞中均有表達(dá)，近來(lái)的顯性失活突變體實(shí)驗(yàn)表明FGFR-1在小鼠胚胎發(fā)育過(guò)程中，對(duì)于維管結(jié)無(wú)能的形成和維持具有極其重要的作用。

五、 胰島素受體（Insulin receptor, InsR）家族
      InsR受體家族的成員包括胰島素受體的相關(guān)性受體Insulin receptor-related receptor,
IRR）三個(gè)成員。這亞家族的受體由2個(gè)（半分子通過(guò)二硫鍵形成三個(gè)異源二聚體），亞基包含1個(gè)半胱氨酸豐富區(qū)，且提供了生長(zhǎng)因子結(jié)合產(chǎn)位，而亞基則提供了跨膜區(qū)和胞內(nèi)的酪氨酸激酶區(qū)。
IGF1R位于人第15號(hào)染色體的長(zhǎng)臂（15q25-q26），包括一個(gè)130kDa的α亞基和一個(gè)95kDa的β亞基。由1367個(gè)氨基酸組成，979-1254位屬于蛋白激酶區(qū)。IGF1R能與IGF-I（Insulin-like growth factor-I）和IGF-Ⅱ（Insulin-like growth factor-Ⅱ）以提高的親和力（Kd分別為1nM和3nM）結(jié)合，IGF1R也可以和胰島素結(jié)合，不過(guò)親和力低了100倍。
      IGF-I、IGF-Ⅱ?qū)θ橄侔�、頸癌、結(jié)腸癌和肺癌等多種腫瘤有促增殖和抑制凋亡的作用。IGF1R在乳腺癌頸 癌中過(guò)表達(dá)，且對(duì)乳腺癌的病理過(guò)程有很大的影響。另外，IGF1R與眼色素底的黑色素瘤的轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，是這類(lèi)腫瘤轉(zhuǎn)移的預(yù)示因子。

六、 肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體（Hepatocyte growth factor receptor, HGFR）家族
      HGFR家族的受體包括Met/ HGFR和RON/MSPR。這一家族的受體以一種異二聚體的
形式存在，包括α、β二個(gè)亞基，二亞基以二硫鍵相連，α亞基位于胞外，β亞基伸入膜內(nèi)，且含有一個(gè)酪氨酸激酶區(qū)。
      Met位于人第7號(hào)染色體的長(zhǎng)臂（7q31），包括一個(gè)50kDa的α亞基和一個(gè)145kDa的β
亞基。由1408個(gè)氨基酸組成，1096*1355位屬于酪氨酸激酶區(qū)。肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子（hepatocyte growth factor , HGF），又名分散因子（Scatter factor , SF）是Met的配體。
Met與HGF/SF在乳腺癌、結(jié)腸癌、胃癌、前列腺癌等多種腫瘤中共表達(dá)，Met的過(guò)表達(dá)、HGF/SF的上調(diào)與這些腫瘤的轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)密切相關(guān)，已有的研究表明，Met極有可能成為診斷腫瘤轉(zhuǎn)移和評(píng)價(jià)預(yù)后反應(yīng)的重要指標(biāo)。進(jìn)一步分子機(jī)理研究表明，HGF/SF能夠誘導(dǎo)β-連環(huán)蛋白（β-catenin）的酪氨酸磷酸化，破化腫瘤細(xì)胞間的粘附，從而促進(jìn)細(xì)胞運(yùn)動(dòng)。HGF/SF還可以誘導(dǎo)尿激酶及其受體的表達(dá)，從而激活蛋白磷信號(hào)途徑，引起胞外基質(zhì)的降解。蛋白酶降解胞外基質(zhì)，破壞細(xì)胞粘附，提高細(xì)胞運(yùn)動(dòng)性是腫瘤細(xì)胞侵襲的關(guān)鍵。
      另外，Met的GOF點(diǎn)突變與腎癌的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。
七、 Tie家族
      Tie家族包括兩個(gè)成員：Tie1和Tie2（Tek）。Tie家族成員都有2個(gè)胞外的Ig-like結(jié)構(gòu)
域和一個(gè)胞內(nèi)的酪氨酸酶活性區(qū)域。Tie2位于人第9叼染色體的短臂（9p21）,由1124個(gè)氨基酸組成，814-1096位屬于蛋白激酶區(qū)；Tie1位于人第1號(hào)染體的短臂（1p34-- p 33），由1138個(gè)氨基酸組成，839-1118位屬于蛋白激酶區(qū)。
Tie2受體的專(zhuān)一配體主要為Angiopietin (Ang)家族成員，包括Ang1、Ang 2、Ang3、
Ang4。 Ang1和 Ang2都可以與Tie2結(jié)合，但只有Ang1可以磷酸化激活Tie2，Ang 2則是Tie2受體的拮抗劑，有關(guān)Ang3、Ang4的研究剛剛開(kāi)始，Ang4的作用可能與Ang1相似。Tie1的配體目前尚不清楚。
      Tie家族主要在內(nèi)皮細(xì)胞中表達(dá)，胎兒時(shí)期所有的內(nèi)皮細(xì)胞中均可能檢測(cè)到Tie1和Tie2
的表達(dá)，而在成人組織的內(nèi)皮細(xì)胞中，主要只檢測(cè)到Tie2的表達(dá)，而Tie1僅發(fā)現(xiàn)在部分血管內(nèi)皮細(xì)胞中有表達(dá)，另外，在毛細(xì)血管母細(xì)胞瘤，血管內(nèi)皮細(xì)胞瘤，胃腺癌細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)Tie過(guò)表達(dá)。
與VEGFR家族成員類(lèi)似，Tie家族成員 對(duì)腫瘤新血管生血管生成有重要促進(jìn)作用。基因剔除小鼠的研究發(fā)現(xiàn)，在Tie2缺失的小鼠中，內(nèi)皮細(xì)胞數(shù)量正常，集成管腔，但由于缺乏外周內(nèi)皮細(xì)胞，血管幼稚，呈散在排列，無(wú)法形成網(wǎng)絡(luò)樣分支。同時(shí)內(nèi)皮細(xì)胞呈圓形，與周?chē)�基質(zhì)連接疏松，說(shuō)明Tie-2參與構(gòu)建血管非內(nèi)皮細(xì)胞的部分，使得血管結(jié)構(gòu)得以定整；而Tie1缺失的小鼠，可延至出生后死亡，鏡下發(fā)現(xiàn)血管出血、水腫，提示Tie-1參與調(diào)控微血管液體交換及血流動(dòng)力學(xué)過(guò)程。

 非受體型酪氨酸激酶與腫瘤
      非受體酪氨酸激酶家族主要有十大家族：SRC、ABL、JAK、CSK、FAK、FES、FRK、TEC、SYK/（圖3）。它們?cè)谛盘?hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通咱起著重要作用，近來(lái)發(fā)現(xiàn)32個(gè)胞漿內(nèi)的蛋白酪氨酸激酶近一半與人類(lèi)癌癥密切相關(guān)，以下介紹幾類(lèi)惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)的非受體型酪氨酸激酶。

一、 SRC家族
     SRC家族已經(jīng)鑒定的成員 有Fgr、Fyn、Sre、Yes、BIK、Hck、Lck、Lyn。家族中的
許多成員有組織分布特異性，并在特定的造血細(xì)胞中表達(dá)，只有Fyn、Sre、Yes普遍表達(dá)。SRC家族蛋白的過(guò)表達(dá)與相當(dāng)多腫瘤疾病有關(guān)，認(rèn)為其與生長(zhǎng)因子有協(xié)同作用，具有癌基因活性。Sre家族激酶的結(jié)構(gòu)在很大程度上具有相似性，有相同的結(jié)構(gòu)域和調(diào)節(jié)機(jī)制。他們含有一個(gè)或者多個(gè)氨基端的酰基化位點(diǎn)（膜定位所需的），一個(gè)獨(dú)特的結(jié)構(gòu)域（鑒定保個(gè)成員）、SH3結(jié)構(gòu)域、SH2結(jié)構(gòu)域、催化結(jié)構(gòu)域和羧基未端Tyr529（抑制位）。
      SRC家族在生長(zhǎng)因子誘導(dǎo)的胞內(nèi)反應(yīng)中起著重要作用，包括增殖、存活、粘連和遷移。許多直接的證據(jù)證明c-Src與人類(lèi)癌癥密切相關(guān)，如乳腺癌、肝癌和結(jié)腸癌等。在惡性腫瘤細(xì)胞中c-Src大量聚集在核周，而在正常的細(xì)胞內(nèi)c-Src相對(duì)均勻的散布于細(xì)胞質(zhì)內(nèi)。已發(fā)現(xiàn)c-Src在結(jié)腸癌中活性極高，尤其是在腫瘤轉(zhuǎn)移到肝臟中后。與正常乳腺組織相比，c-Src在人乳腺癌中的活性提高了4-30倍，同時(shí)c-Src蛋白表達(dá)量也相應(yīng)增加。

二、 ABL家族
      ABL家族包括兩個(gè)成員：Abl和Arg。Abl基因位于9號(hào)染色體長(zhǎng)臂（9q34.1）,編碼145-KD
的Abl蛋白。c-Abl蛋白是有酪氨酸激酶活性的復(fù)合物，含有SH3、SH2、PTK、DNA結(jié)合域、肌動(dòng)蛋白結(jié)合結(jié)構(gòu)域等，有抑制細(xì)胞生長(zhǎng)的作用。已知有兩類(lèi)c-Abl，由兩個(gè)不同的啟動(dòng)子P1和P2分別是控制，對(duì)外元進(jìn)行不同的剪接，形成兩個(gè)不同的Abl蛋白，分別為c-Ab I a和1b。c-Ab1主要位于細(xì)胞核，靠其C端的核定位信號(hào)（NLS）定位，當(dāng)?shù)鞍走^(guò)表達(dá)時(shí)也可以在細(xì)胞質(zhì)中發(fā)現(xiàn)。細(xì)胞分裂時(shí)，cdkl或蛋白激酶C（PKC）磷酸化其C端的DNA結(jié)合區(qū)域，阻止其與DNA的結(jié)合。c-Ab1隨著細(xì)胞周期進(jìn)行磷酸化和去磷酸化，但其特異性磷酸化的靶蛋白現(xiàn)在還沒(méi)有得到。除了單倍體生殖細(xì)胞外，c-Ab1在造血組織和其他組織中有廣泛表達(dá)。過(guò)表達(dá)c-Ab1會(huì)誘導(dǎo)p21的表達(dá)，下調(diào)cdk2，引志細(xì)胞周期停滯。細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制需要酪氨酸激酶活性區(qū)域、核定位域和完整的SH2結(jié)構(gòu)域的協(xié)同作用。
      費(fèi)城染色體（Philadelphia chromosome，PH）是迄今發(fā)現(xiàn)的首例染色體異常與特殊類(lèi)型的白血病緊密相關(guān)。Ber-Abl融合蛋白在慢性髓樣白血病（CML）患者體內(nèi)普遍表達(dá)，該融合蛋白是由于CML患者體內(nèi)存在費(fèi)城染色體，其9號(hào)染色體和22號(hào)染色體發(fā)生易位，9號(hào)染色體長(zhǎng)臂未端（9q34）的c-Abl原癌基因斷裂，并與22號(hào)染色體長(zhǎng)臂未端（22q11）的c-Bcr基因的3端發(fā)生融合形成。CML患者的Bcr-Abl融合蛋白的分子量大約為210kDa[43]。P210Bcr-Abl融合蛋白對(duì)CML的惡性轉(zhuǎn)化具有關(guān)鍵作用。與Abl蛋白酪氨酸激酶相比，P210Bcr-Abl的激酶活性大大增強(qiáng)，主要是自磷酸化水平顯著提高。P210Bcr-Abl自磷酸化后，為Grb-2、SHC、CRKL等一系列銜接蛋白分子提供結(jié)合位點(diǎn)，從而起始激活RAS/MAPK信號(hào)途徑或Jak/Stat信號(hào)途徑，[44]，上調(diào)核內(nèi)基因c-myc、bcl-2、c-fos等的表達(dá)。而且，在P210Bcr-Abl中，Abl蛋白的actin結(jié)合功能也有提高。這些信號(hào)途徑的異常使骨髓前體細(xì)胞發(fā)生癌變，增殖異常，分化和凋亡受到抑制，并且降低了這些細(xì)胞與骨髓基質(zhì)的粘附作用，使其被釋放到血液循環(huán)而進(jìn)入CML的慢性潛伏階段。

三、 JAK（Jamus Kinase）家族
     JAK在細(xì)胞因子信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的初始步驟中起著至關(guān)緊要的作用。JAK家族包括四個(gè)成員：
TYK2、JAD1、JAK2、JAK3，它們分處于三個(gè)染色體簇中，分子量介于110-140kDa。編碼JAK1的基因位于人1號(hào)染色體短臂（1p31.1）。JAK2在9號(hào)染色體（9p24），JAK3和TYK2位于19號(hào)染色體短臂（分別是19p13.1和19p13.2）。TYK2、JAK1T JAK2表達(dá)普遍，而JAK3的表達(dá)主要局限于造血細(xì)胞。
    JAKs的氨基酸序列排列提示了它們擁有7個(gè)高度保守的結(jié)構(gòu)域（JH1-JH7）；它們各自
的催化域和共同的功能在很大的程度上還不很清楚。JAK家族成員有兩個(gè)獨(dú)特的性質(zhì)：第一，羧基端有一前一后兩個(gè)激酶和激酶 樣的組件（JH1、JH2）。第二，JAK氨基端區(qū)域（JH7-JH3）與其他10個(gè)非受體酸呀氨酸、激酶家族成員之間沒(méi)有顯示同源性。
JAK與少數(shù)幾種人類(lèi)白血病密切相關(guān)，另外，在幾種惡性腫瘤發(fā)現(xiàn)它的下游底物Stat3
和Stat5都處于磷酸化的活化狀態(tài)。

四、 FAK家族
      此家族成員，除了FAK外，還有Pyk2(CAKβ/RAFTK/cadTK/FAK2)。FAK基因位于8
號(hào)染色體的長(zhǎng)臂（8q24-qter）,PYK2位于8號(hào)染色體的短臂（8p22-p11.2）.
粘著斑激酶（FAK）是一類(lèi)特殊的胞質(zhì)內(nèi)蛋白酪氨酸激酶家族，它沒(méi)有SH2和SH3結(jié)
構(gòu)域，其粘著斑導(dǎo)向序列位于蛋白C端。FAK有六個(gè)酷氨酸化位點(diǎn)，通過(guò)它可以與Src激酶的SH2結(jié)構(gòu)域反應(yīng)。在崔化結(jié)構(gòu)域中的兩位酪氨酸576和577位是磷酸化作用的調(diào)節(jié)們位點(diǎn)，增強(qiáng)催化活性。位于FAK羧基端上925位酷氨酸化產(chǎn)生一Grb2的SH2結(jié)構(gòu)域結(jié)合的位點(diǎn)，從而激活Ras/MAPK途徑。FAK 羧基端脯氨酸富集序列含有SH3結(jié)構(gòu)域的結(jié)歙閏點(diǎn)和介導(dǎo)著p130cas和GRAF的結(jié)合。FAK的粘著斑靶向（FAT）序列位于羧基端，介導(dǎo)FAK定位于粘著斑。這個(gè)區(qū)域還包含了兩個(gè)粘著斑結(jié)合蛋白位點(diǎn)：paxilin和talin。
      FAK參與粘附糖蛋白細(xì)胞反應(yīng)，其信號(hào)通過(guò)整聯(lián)蛋白受體傳導(dǎo)；還參與促分裂神經(jīng)肽
的細(xì)胞反應(yīng)，其信號(hào)通過(guò)G蛋白偶聯(lián)受體傳導(dǎo)途徑中關(guān)健的第一步。FAK被認(rèn)為可以調(diào)節(jié)細(xì)胞的形態(tài)和遷移，幫助細(xì)胞生長(zhǎng)貼壁，將基因轉(zhuǎn)錄改變的信號(hào)傳入細(xì)胞核。
      FAK在不同的組織中有表達(dá)，在惡性轉(zhuǎn)移腫瘤中的表達(dá)特別高。FAK在不同腫瘤組織中的表達(dá)是不同的，在前列腺癌、乳腺癌、結(jié)腸癌、卵巢癌、口腔癌和甲狀腺癌的發(fā)生過(guò)程中，F(xiàn)AK的表達(dá)均有提高。尤其是在乳腺癌和結(jié)腸癌組織中，F(xiàn)AK表達(dá)極高。鈴蟾肽、肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子（HGF）、促乳素等可以刺激腫瘤細(xì)胞中FAK的表達(dá)。FAK不具有經(jīng)典的癌蛋白功能，但它在整合素信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和整合素所參與腫瘤發(fā)展過(guò)程及轉(zhuǎn)移進(jìn)程中都起著重要作用，這意味著FAK可能成為針對(duì)惡性細(xì)胞多元發(fā)展過(guò)程中的一個(gè)靶點(diǎn)。

靶向蛋白酪氨酸激酶的抗腫瘤治療
      蛋白酪氨酸激酶抑制劑已成為世界抗腫瘤研究的熱點(diǎn)領(lǐng)域，國(guó)際上各大研究機(jī)構(gòu)，制藥集團(tuán)都非常重視以酪氨酸激酶為靶點(diǎn)的藥物研發(fā)，包括發(fā)展小分子蛋白酪氨酸激酶抑制劑，蛋白酪氨酸激酶的特異性單克隆抗體以及反義寡核苷酸等。目前已有十多種蛋白酪氨酸激酶抑制劑和抗體進(jìn)入I-Ⅲ期臨床試驗(yàn)階段，個(gè)別的已經(jīng)上市。下面將針對(duì)HerceptinTM和GleevecTM研究中取得的經(jīng)驗(yàn)和教訓(xùn)以及其他處于臨應(yīng)研究階段的靶向于EGFR家族和VEGFR家族的小分子抑制劑及抗體研發(fā)的最新進(jìn)展做了一簡(jiǎn)單介紹。