環孢素A對滋養細胞生物學功能

　　環孢素A（新山地明，Cyclosporin A，CsA）自20世紀70年代應用于臨床以來，作為免疫抑制劑發揮了極其重要的作用；環孢素A（新山地明）是目前公認的抑制移植排斥反應最為有效的藥物。環孢素A（新山地明）對某些自身免疫性疾病的治療亦已取得一定的療效。正常生理妊娠類似于同種異體移植，胚胎作為自然的同種移植物不受母體免疫排斥是免疫排斥現象的唯一例外，實際上反映母體對胚胎的免疫耐受。而妊娠失敗多因母體對胚胎的免疫排斥所致。

　　研究發現，于孕早期（胚胎著床期）腹腔注射CsA，可恢復小鼠妊娠失敗模型母—胎界面Th1/Th2/Th3型細胞因子免疫調節的生理平衡，形成維持正常妊娠所需的Th2/3型免疫偏倚，并誘導外周免疫細胞對父系抗原的免疫耐受，使流產模型的妊娠預后達到正常妊娠水平；體外實驗證實CsA可刺激人早孕期滋養細胞生長，并改變其細胞形態，使其遷移能力及侵襲性增強。采用抑制性差減雜交法獲得在CsA作用于人JAR細胞系后6個高表達基因，其中1個為已知基因，2個為功能未知的mRNA，3個為位于16號染色體上的EST。顯然CsA對母胎界面具有良好的調節作用。

　　滋養細胞攜帶來自胎兒的外胚層抗原，是母胎界面唯一與母體免疫系統直接接觸的胎兒細胞，在母胎免疫耐受中發揮重要作用。許多病理性妊娠，如反復自然流產、妊高征及胎兒宮內生長遲緩等均伴有滋養細胞某些生物學功能異常。以CsA作為研究工具，觀察CsA對細胞滋養細胞生物學功能及功能基因表達的影響，并進一步解析其信號轉導機制，對于解析CsA新的藥效機制，具有重要意義。

　　環孢素A（新山地明）研究通過原代培養早孕期人細胞滋養細胞及JAR滋養細胞株，在CsA作用下，研究作為自然移植物的細胞滋養細胞生物學功能及功能基因表達的改變及其信號轉導機制。為反復自然流產等妊娠疾患的治療提供線索。

環孢素A（新山地明）對人早孕期細胞滋養細胞的分離、培養及鑒定

　　目的 環孢素A（新山地明）對建立早孕期人細胞滋養細胞的分離、純化方法，了解CD133在滋養層細胞的表達情況，為鑒定滋養層細胞株及原代分離的細胞滋養層細胞提供新的細胞內標志。

　　方法 通過胰蛋白酶/DNase Ⅰ分步消化，Percoll密度梯度離心法分離純化細胞滋養層細胞，經抗Cytokeratin7、Vimentin單克隆抗體免疫細胞化學和流式細胞術鑒定其純度。采用三種不同的CD133熒光標記的單克隆抗體在70％的甲醇固定前后對原代分離的細胞滋養層細胞和絨毛膜上皮癌細胞株（JAR）行流式細胞術（FCM）分析。

　　結果 抗Cytokeratin7、Vimentin單克隆抗體行免疫細胞化學和流式細胞儀鑒定細胞滋養細胞純度達95％以上。70％甲醇固定前，三種CD133單克隆抗體均不能與滋養層細胞反應；70％甲醇固定后，抗CD133-1（AC133-1-APC）、抗CD133-2（293C3-PE）仍不能與滋養層細胞反應，而抗CD133-2（AC141-PE）與細胞滋養層細胞胞內抗原結合。AC141陽性的細胞也是Cytokeratin7陽性的細胞。

　　綜上所述，胰蛋白酶/DNase Ⅰ分步消化，Percoll密度梯度離心法可簡單、快速獲得高純度人早孕期細胞滋養細胞。CD133-2/AC141可作為細胞滋養層細胞鑒定的一種可靠細胞內標志。

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