羥基喜樹堿對胃癌細(xì)胞凋亡和細(xì)胞周期的影響

羅執(zhí)芬，周云 ，劉明月
河南省人民醫(yī)院腫瘤科鄭州市450003

【摘要】 目的 探討羥基喜樹堿誘導(dǎo)胃癌細(xì)胞凋亡與細(xì)胞周期變化的關(guān)系。方法 用MTT法測定不同濃度的HCPT對胃癌細(xì)胞的生長抑制作用，用流式細(xì)胞儀測定一定濃度下不同作用時間細(xì)胞凋亡率和細(xì)胞周期的變化。結(jié)果 在3．125～5O．O g／ml濃度范圍內(nèi)藥物對細(xì)胞的抑制率隨濃度的增加而增加；在相同濃度下，隨時間的延長細(xì)胞的凋亡率也逐漸增加，0、12、24、48h的凋亡率為2、8％ 、8．5％ 、10．2％ ，13．3％ ，在24h內(nèi)S期細(xì)胞減少而Gn／G 細(xì)胞增多，第二個24h S期和G ／M的阻滯。結(jié)論 羥基喜樹堿可誘導(dǎo)胃癌細(xì)胞凋亡，其細(xì)胞凋亡與細(xì)胞周期分布有關(guān)。

關(guān)鍵詞 羥基喜樹堿；胃癌；細(xì)胞凋亡

    羥基喜樹堿是從我國特有的珙桐科植物喜樹中提取分離的天然生物堿，是一類廣譜的抗腫瘤藥，尤其在消化道腫瘤中的應(yīng)用更多。近年來不少研究人員對羥基喜樹堿誘導(dǎo)不同腫瘤細(xì)胞的凋亡進(jìn)行了大量的研究，細(xì)胞周期與凋亡有著密切的關(guān)系，為了探討羥基喜樹堿誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡與細(xì)胞周期的關(guān)系，為臨床設(shè)計更有效的治療方案提供實驗室依據(jù)，特設(shè)計此實驗。

1 材料與方法
1．1 材料 ①細(xì)胞株：人胃癌細(xì)胞BGC一823，河南省醫(yī)學(xué)研究所惠贈。② 實驗用藥物及試劑：羥基喜樹堿為湖北黃石飛云藥業(yè)產(chǎn)品；1640培養(yǎng)基為GIBCO公司產(chǎn)品；四甲基偶氮唑藍(lán)(MTY)為Sigma公司產(chǎn)品；標(biāo)準(zhǔn)胎牛血清為天津TBD血液研究所產(chǎn)品。

1．2 方法 ①MrlT法測定不同濃度羥基喜樹堿對細(xì)胞生長的抑制率。實驗藥物濃度按預(yù)實驗結(jié)果選五個濃度組即0、3．125、6．250、12．500、25．000、50．O00gg／ml。取對數(shù)生長期的細(xì)胞稀釋成4×10 ／ml，接種于96孔板，孵育24 h，按實驗設(shè)計加入實驗用藥，設(shè)實驗組和對照組，每組設(shè)4個復(fù)孔，放人培養(yǎng)箱中孵育48 h，用酶聯(lián)免疫檢測儀在570 am波長測每孔的吸光值(A)，按下列公式計算細(xì)胞生長抑制率：細(xì)胞生長抑制率(％)=(1一實驗組平均A值／對照組平均A值)×100％。每組重復(fù)5次。②細(xì)胞凋亡率和細(xì)胞周期檢測：本次取6．2501xg／ml組作流式細(xì)胞儀檢測，取4個時間段，即藥物作用后0、12、24、48 h進(jìn)行檢測。按實驗設(shè)計處理細(xì)胞后，用70％ 的冷乙醇固定。采用碘化丙錠(PI)一步插人性DNA定量熒光染色法，檢測細(xì)胞周期和細(xì)胞凋亡率。

1．3 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS10．0統(tǒng)計軟件包處理。計量資料采用正態(tài)性檢驗，方差齊性檢驗，率的比較采用x 檢驗，以 =0．05為檢驗水準(zhǔn)。

2 結(jié)果
    本實驗中HCPT單藥對BGC一823細(xì)胞有明顯的抑制生長的作用(見圖1)，其IC50為27．420~g／ml。相關(guān)性分析結(jié)果相關(guān)系數(shù)r為0．986。在流式細(xì)胞圖上可看到典型的亞二倍體凋亡峰(見圖2)，細(xì)胞周期分布顯示(見表1)，24h內(nèi)S期細(xì)胞隨時間延長而減少，G。／G。期細(xì)胞漸增多，凋亡率也增加。與0h相比有統(tǒng)計學(xué)差異。

3 討論
    本組實驗表明羥基喜樹堿可以誘導(dǎo)胃癌BGC一823細(xì)胞的凋亡，其凋亡率有時問依賴性，其與細(xì)胞周期的變化有一定的相關(guān)性。在0h S期細(xì)胞所占的比率較大，加入藥物后的第一個24h，細(xì)胞中S期細(xì)胞的比率明顯下降，而G 期的細(xì)胞增多。在第二個24h S期細(xì)胞明顯增多，與0h比較有統(tǒng)計學(xué)意義。說明羥基喜樹堿誘導(dǎo)凋亡的機(jī)制可能與G．期和S期細(xì)胞的阻滯有關(guān)。許青在胃癌細(xì)胞，肺癌細(xì)胞上研究了羥基喜樹堿誘導(dǎo)凋亡的機(jī)制，揭示了誘導(dǎo)凋亡是其抗腫瘤作用的主要機(jī)制之一。Chai LP 用低劑量的HCPT作用于喉鱗癌細(xì)胞，表現(xiàn)出G ／M的阻滯，高劑量時表現(xiàn)出s期細(xì)胞的阻滯。而本試驗低劑量時表現(xiàn)出第一個24h G。阻滯和第二個24h的S和G ／M期的阻滯，這一特點與喜樹堿的半合成品伊立替康作用于結(jié)腸癌細(xì)胞HT一29對細(xì)胞周期的分布影響有相似之處 J。細(xì)胞凋亡存在著周期特異性，表現(xiàn)為不同的因素誘導(dǎo)的凋亡，發(fā)生在細(xì)胞的不同周期時段。進(jìn)一步地研究HCPT對細(xì)胞周期的分布特點，將為不同藥物聯(lián)合使用提供實驗室依據(jù)。

參考文獻(xiàn)（略）

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