附桂骨痛片中總生物堿的含量測(cè)定

    附桂骨痛片復(fù)方是取自《金匱要略》烏頭湯之精華組方，由附子、川烏、肉桂、黨參、當(dāng)歸、白芍、淫羊藿、乳香8味中藥組成，其獨(dú)特的組方，對(duì)于陽虛寒濕型頸椎及膝關(guān)節(jié)增生性關(guān)節(jié)炎具有良好的治療作用，臨床試驗(yàn)有效率達(dá)95％，是治療此類疾病的理想藥物。此復(fù)方中，附子和Jil烏中所含的烏頭類總生物堿是附桂骨痛片復(fù)方中的主要有效成分。質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中生物堿含量的測(cè)定方法采用簡(jiǎn)單的萃取稱重法H，缺乏可靠性和準(zhǔn)確性，而目前關(guān)于附桂骨痛片復(fù)方中總生物堿含量的檢測(cè)方法的相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道幾乎空白。為有效控制藥品質(zhì)量，根據(jù)生物堿和酸性染料溴甲酚綠在酸性緩沖液中形成的絡(luò)合物在特定波長(zhǎng)下有吸收的原理，本文采用酸性染料比色法測(cè)定其中總生物堿的含量，并對(duì)其方法學(xué)進(jìn)行了考察。 

    分析方法條件優(yōu)化：酸性染料比色法成功與否的關(guān)鍵在于水相的pH值，pH過高或過低都不能使酸性染料與生物堿完全絡(luò)合，影響測(cè)量結(jié)果的真實(shí)性。分別配制pH值為3．00，3．40，3．50，3．60，4．00，4．50，5．00的檸檬酸．磷酸氫二鈉緩沖液。烏頭堿與BCG形成的絡(luò)合物在412．5 nm波長(zhǎng)處有最大吸收峰，因此取相同量的對(duì)照品溶液，于412．5 nm 波長(zhǎng)處測(cè)定不同pH值水相下的吸光度值。不同pH值對(duì)烏頭堿與溴甲酚綠離子對(duì)形成程度關(guān)系。結(jié)果表明在緩沖液pH值為3．50的環(huán)境下，烏頭堿與溴甲酚綠離子對(duì)形成程度較大，pH值進(jìn)一步加大或減小，離子對(duì)形成程度都減小。故采用pH值為3．50的檸檬酸一磷酸氫二鈉緩沖液作為最適的水相。本文曾用過醋酸一醋酸鈉緩沖溶液 ，可能由于它的緩沖范圍比較窄。 

    附桂骨痛片復(fù)方中藥味較多，提取液成份復(fù)雜，為考察本方法對(duì)烏頭總生物堿測(cè)定的唯一性，進(jìn)行專屬性試驗(yàn)。除去處方藥中川烏和附子，模仿附桂骨痛片復(fù)方的制備工藝，按上述方法制備陰性供試品溶液并在300～500 nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)掃描吸光度值，。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明其陰性樣品液在412．5 nm波長(zhǎng)處無吸收，說明該方法用于測(cè)定烏頭類總生物堿有很好的專屬性。目前烏頭總生物堿的測(cè)定主要有兩種方法：中和法和酸性染料比色法。中和法一般用于川烏、草烏、附子單味藥材烏頭總生物堿含量測(cè)定。本文曾嘗試用中和法測(cè)定附桂骨痛片復(fù)方中總生物堿的含量，但是重現(xiàn)性不夠理想，靈敏度差，可能是由于復(fù)方中成分復(fù)雜，干擾因素較多造成的。 

    采用pH值為3．5的檸檬酸．磷酸氫二鈉作緩沖液，在萃取液靜置0．5～3．0 h內(nèi)，于412．5 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度，穩(wěn)定性良好。 

    烏頭堿質(zhì)量濃度在10．12～22．77 t~g／mL范圍內(nèi)與吸光度線性關(guān)系良好(r=0．9996，，l=6)，其平均加樣回收率為99．27％。酸性染料比色法方法準(zhǔn)確，可作為附桂骨痛片復(fù)方的定量測(cè)定方法。

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