防感香袋對(duì)反復(fù)呼吸道感染患兒免疫調(diào)控的影響

　　反復(fù)呼吸道感染是臨床常見病、多發(fā)病，影響患兒的身心健康。造成呼吸道感染的病毒變異繁多，耐藥菌株及條件致病菌的出現(xiàn)使該病西醫(yī)預(yù)防治療成為難題。我們自2002年至今外用中藥防感香袋調(diào)控反復(fù)呼吸道感染患兒的免疫功能，現(xiàn)將研究結(jié)果報(bào)告如下。

　　目的：觀察中藥防感香袋對(duì)反復(fù)呼吸道感染患兒免疫調(diào)控的影響。方法：檢測(cè)58例反復(fù)呼吸道感染患兒使用防感香袋治療前后的多項(xiàng)免疫功能指標(biāo)，旨在研究反復(fù)呼吸道感染患兒的基礎(chǔ)免疫狀態(tài)及防感香袋對(duì)反復(fù)呼吸道感染患兒的免疫調(diào)控作用。結(jié)果：反復(fù)呼吸道感染患兒機(jī)體免疫功能低下，免疫狀態(tài)紊亂不平衡； 防感香袋對(duì)反復(fù)呼吸道感染患兒有明顯的免疫調(diào)節(jié)作用，可提高患兒的免疫功能。結(jié)論：防感香袋可作為反復(fù)呼吸道感染患兒的長(zhǎng)期免疫調(diào)節(jié)劑。

　　1 臨床資料1.1 診斷標(biāo)準(zhǔn)根據(jù)1987年4月成都召開的全國小兒呼吸道疾病學(xué)術(shù)會(huì)議擬定的小兒反復(fù)呼吸道感染的診斷標(biāo)準(zhǔn)[1]制定。

　　1.2 一般資料2002年4月至2006年4月期間，臨床確診的反復(fù)呼吸道感染患兒58例，均為青島兒童醫(yī)院中醫(yī)科門診患兒，其中男27例，女31例，年齡最大13 歲，最小3歲，平均年齡6歲。

　　2 方法2.1 治療方法2.1.1 處方黃芪125 g、蒼術(shù)（炒）62.5 g、防風(fēng)41.6 g、辛夷62.5 g、白芷62.5 g、蟬蛻62.5 g、柴胡21 g、桑葉62.5 g、野菊花62.5 g、魚腥草41.6 g、花椒41.6 g、川芎41.6 g、桂枝62.5 g、麥芽（炒）62.5 g、砂仁62.5 g、紫蘇葉62.5 g、桔梗41.6 g、冰片20 g.

　　2.1.2 使用方法將藥材凈選，冰片研細(xì)，其余黃芪等17味中藥置烘箱中50~60 ℃烘3~4 h,放冷后粉碎，過80目篩，加入冰片細(xì)粉，混勻，環(huán)氧乙烷滅菌30 min即得（青島市婦女兒童醫(yī)療保健中心制劑室生產(chǎn)，青島市藥檢局初檢，山東省藥檢局審驗(yàn)。批準(zhǔn)文號(hào)：魯藥制字Z0220030133,每批產(chǎn)品須經(jīng)檢驗(yàn)合格后方可使用）。每次取藥30 g置于10 cm×8 cm棉布袋中即為1個(gè)防感香袋，晝間貼身置于肚臍之上，夜間放置枕邊，每30 d更換1次，連續(xù)使用3月。

　　2.2 觀察指標(biāo)2.2.1 實(shí)驗(yàn)室檢查指標(biāo)（1）T淋巴細(xì)胞亞群百分率檢測(cè)：采用單克隆抗體間接免疫熒光法檢測(cè)培養(yǎng)前（0 h）外周血CD+3,CD+4,CD+8細(xì)胞百分率和CD+4/CD+8比值。

　�。�2）免疫球蛋白IgG,IgA,IgM:采用免疫比濁法檢測(cè)。

　�。�3）PCD凋亡細(xì)胞計(jì)數(shù)：計(jì)數(shù)200個(gè)細(xì)胞并計(jì)算出凋亡細(xì)胞百分率，分別檢測(cè)培養(yǎng)0,48 h淋巴細(xì)胞凋亡率。

　�。�4）血清Fas及FasL水平檢測(cè)：采用雙抗體夾心ABC|ELISA法。

　　（5）IL|2,IFN|γ檢測(cè)：采用ELISA法。

　�。�6）紅細(xì)胞C3b和IC花環(huán)：采用郭峰設(shè)計(jì)的酵母多糖花環(huán)試驗(yàn)。

　　2.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理方法采用SPSS統(tǒng)計(jì)軟件。結(jié)果用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，P<0.05定為差別有統(tǒng)計(jì)意義。

　　3 結(jié)果3.1 外周血T淋巴細(xì)胞亞群治療前后比較表1外周血T淋巴細(xì)胞亞群治療前后比較3.2 免疫球蛋白治療前后比較表2 免疫球蛋白治療前后比較3.3 外周血T淋巴細(xì)胞凋亡率治療前后比較表3 治療前后外周血T淋巴細(xì)胞凋亡率比較3.4 Fas,FasL治療前后比較表4 Fas,FasL治療前后比較3.5 IL|2,IFN|γ治療前后比較表5 IL|2,IFN|γ治療前后比較3.6 紅細(xì)胞免疫黏附功能檢測(cè)表6 反復(fù)呼吸道感染患兒紅細(xì)胞免疫黏附功能檢測(cè)結(jié)果4 討論反復(fù)呼吸道感染屬于“感冒”范疇，祖國醫(yī)學(xué)認(rèn)為，小兒肺脾腎常不足，衛(wèi)氣虛弱，腠理空虛，表虛汗溢，風(fēng)邪乘虛而入，邪毒留伏，以成外感傷風(fēng)之疾，邪毒之惡稍愈又作，往復(fù)不已，即為反復(fù)呼吸道感染。我們選用扶正宣肺固表、健脾益氣和胃、祛風(fēng)清熱解毒的藥物制成防感香袋，患兒隨身佩戴即可給藥，用外治法解決了治療慢性病時(shí)小兒口服藥物困難又懼怕打針的臨床難題。神闕穴位于臍中，該穴可聯(lián)絡(luò)全身經(jīng)脈，并通過各經(jīng)之循行直接影響五臟六腑、四肢百骸。臍療除防治中焦之病外，上下焦之病均可取之。現(xiàn)代研究表明，在胚胎發(fā)育過程中，臍為腹壁最后閉合處，其表皮角質(zhì)層最薄，屏障功能最弱，局部皮下無脂肪，血管、淋巴等組織豐富，有利于藥物的滲透與吸收。鼻居面中，為陽中之陽，是諸陽經(jīng)交會(huì)之處；肺開竅于鼻，肺朝百脈，鼻通過經(jīng)絡(luò)亦與五臟六腑相連；且鼻黏膜血管豐富，鼻黏膜嗅覺器官通過嗅神經(jīng)與大腦皮層相連。防感香袋所選藥物多含芳香萜類成分，其含氧衍生物或揮發(fā)油借助佩戴者體溫形成氣體，通過呼吸道吸入與皮膚刺激及滲入發(fā)揮療效。藥物經(jīng)呼吸道吸入，由肺及鼻黏膜毛細(xì)血管彌散至血循環(huán)，并通過臍滲入藥物發(fā)揮療效；藥物還能通過呼吸道局部刺激使黏膜分泌免疫球蛋白等，使呼吸道形成局部生物-生化優(yōu)勢(shì)，構(gòu)成初級(jí)呼吸道防線，因此可以阻止病毒的擴(kuò)散[6],且與呼吸道局部抗體比血中抗體更為重要這一觀點(diǎn)一致[2].另外，含有藥物微粒的藥味通過嗅神經(jīng)傳至大腦，給人一種欣快感，并通過神經(jīng)-體液調(diào)節(jié)產(chǎn)生良好調(diào)節(jié)作用�，F(xiàn)代研究發(fā)現(xiàn)，除上述吸入刺激及反射作用外，尚有經(jīng)絡(luò)免疫作用。所謂經(jīng)絡(luò)免疫就是藥物通過對(duì)經(jīng)絡(luò)刺激機(jī)體產(chǎn)生免疫功能，經(jīng)穴的感傳自身存在著一種特殊的生理放大效應(yīng)，即給予經(jīng)穴小量刺激，可起到相當(dāng)大的治療作用。我們通過肚臍佩戴、頭枕防感香袋使藥物長(zhǎng)期作用經(jīng)絡(luò)和穴位，通過滲透進(jìn)入皮膚，通過調(diào)節(jié)氣血使臟腑安和。吳師機(jī)曰：“外治之法，亦內(nèi)法之理。”小兒防感香袋是祖國醫(yī)學(xué)“內(nèi)病外治”的典型代表。防感香袋是由《丹溪心法》中玉屏風(fēng)散化裁而來。藥物經(jīng)呼吸道及經(jīng)皮吸收，代謝物質(zhì)經(jīng)由毛孔等排出體外，相當(dāng)于中醫(yī)認(rèn)為的邪從表解。

　　我們研究發(fā)現(xiàn)，反復(fù)呼吸道感染患兒存在多個(gè)方面的機(jī)體細(xì)胞免疫功能紊亂、抑制和不平衡狀態(tài)，試驗(yàn)結(jié)果IgG,IgA, IL|2,IFN|γ，CD+4,CD+4/CD+8,RIT,RBC|C3bRR明顯降低，CD+8, IgM,PCD,Fas,FasL,RBC|ICRR明顯升高。一方面，反復(fù)呼吸道感染患兒的細(xì)胞JAK|STAT途徑被抑制，可能阻斷T細(xì)胞IL|2、IFN|γ等細(xì)胞因子的表達(dá)，從而影響細(xì)胞MHC|Ⅱ類分子表達(dá)，而T細(xì)胞的活化是基于T細(xì)胞受體對(duì)APC表面MHCⅡ-肽復(fù)合物的特異性識(shí)別，與MHCⅡ類分子有高親和力的抗原肽能誘導(dǎo)T細(xì)胞向CD+4分化，MHCⅡ類分子表達(dá)受抑，基于體內(nèi)T細(xì)胞活化的動(dòng)態(tài)平衡，也影響到CD+8的活性[5].本研究結(jié)果證明，反復(fù)呼吸道感染患兒T細(xì)胞活化異常，表現(xiàn)為CD+8表達(dá)優(yōu)勢(shì)。在本研究中發(fā)現(xiàn)，反復(fù)呼吸道感染患兒IL|2,IFN|γ水平及CD+4百分率降低，它們互為因果，最終導(dǎo)致細(xì)胞免疫功能低下。

　　研究結(jié)果也證實(shí)反復(fù)呼吸道感染患兒存在免疫功能紊亂。主要表現(xiàn)抑制性T細(xì)胞功能低下，多克隆B細(xì)胞活化和免疫球蛋白分泌異常以及相關(guān)細(xì)胞因子改變。反復(fù)呼吸道感染患兒存在細(xì)胞免疫功能低下，其自身混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)（AMLR）表現(xiàn)在數(shù)量、質(zhì)量和功能的降低；外周血CD+3值、淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)換率及抑制性T淋巴細(xì)胞數(shù)量和功能降低，CD+4/CD+8比值降低；CD+4/CD+8失衡，CD+4功能降低，分泌細(xì)胞因子IL|2及IFN|γ減少，對(duì)CD+8抑制作用減弱，CD+4優(yōu)勢(shì)活化，分泌IL|4、IL|5及IL|6明顯增高；多克隆B細(xì)胞活化，患兒體液免疫反應(yīng)狀態(tài)以血清中IgM升高為主，紅細(xì)胞免疫功能降低，表現(xiàn)為RBC|C3bRR、RIT明顯降低，RBC|ICRR明顯升高。清除血循環(huán)中免疫復(fù)合物（IC）的能力降低。另外，IL|2水平下降，對(duì)抑制性T細(xì)胞的輔助作用減弱，致使Ts細(xì)胞的抑制作用不能有效發(fā)揮，也不能有效地活化NK細(xì)胞，使NK細(xì)胞殺傷和抑制B細(xì)胞的活性下降，導(dǎo)致B細(xì)胞免疫功能紊亂[3].我們研究的另一個(gè)指標(biāo)凋亡（apoptosis,Apo）或稱程序化細(xì)胞死亡，近年來的研究已證實(shí)，淋巴細(xì)胞凋亡在免疫系統(tǒng)的發(fā)育以及免疫反應(yīng)中起著決定性的作用。淋巴細(xì)胞凋亡是免疫系統(tǒng)維持自身免疫耐受的重要機(jī)制。凋亡過多可導(dǎo)致免疫功能低下甚至免疫缺陷[4].有資料證實(shí)反復(fù)呼吸道感染患兒T淋巴細(xì)胞暫時(shí)性功能低下與淋巴細(xì)胞凋亡過甚有關(guān)。反復(fù)呼吸道感染患兒淋巴細(xì)胞凋亡的研究報(bào)道較少，有學(xué)者研究證實(shí)反復(fù)呼吸道感染患兒存在T淋巴細(xì)胞功能紊亂，且存在淋巴細(xì)胞凋亡延遲。相關(guān)分析顯示，T淋巴細(xì)胞凋亡過度與T細(xì)胞功能受抑關(guān)系密切，其中凋亡因子Fas與其配體FasL（Fas ligand）相互作用是引起細(xì)胞凋亡的重要途徑之一。反復(fù)呼吸道感染患兒外周血培養(yǎng)48 h淋巴細(xì)胞凋亡率與Fas、FasL水平呈正相關(guān)。反復(fù)呼吸道感染患兒血清Fas、FasL水平變化和淋巴細(xì)胞凋亡率均明顯增高，上述改變參與反復(fù)呼吸道感染患兒免疫發(fā)病機(jī)制。推測(cè)可能為反復(fù)呼吸道感染患兒急性期因某種機(jī)制致血清sFasL水平增高（可能同時(shí)伴膜FasL表達(dá)增強(qiáng)），誘導(dǎo)T細(xì)胞凋亡增多，由于T細(xì)胞凋亡過甚，致TH細(xì)胞（特別是CD+4細(xì)胞）功能低下，導(dǎo)致CD+8細(xì)胞功能相對(duì)亢進(jìn)（或增強(qiáng)），B細(xì)胞功能過度增強(qiáng)，誘導(dǎo)體液免疫機(jī)制介導(dǎo)為主的血管壁炎癥。

　　我們研究的另一個(gè)內(nèi)容反復(fù)呼吸道感染患兒紅細(xì)胞免疫和紅細(xì)胞CR1基因組密度多態(tài)性分布，結(jié)果顯示紅細(xì)胞免疫功能中RBC|C3bRR 、 RIT明顯降低，RBC|ICRR明顯升高。紅細(xì)胞免疫功能檢測(cè)結(jié)果表明：反復(fù)呼吸道感染患兒紅細(xì)胞C3b受體花環(huán)率明顯降低，提示反復(fù)呼吸道感染患兒紅細(xì)胞免疫功能繼發(fā)性降低，抗原提成作用減低。總之，反復(fù)呼吸道感染患兒紅細(xì)胞免疫功能低下，其主要原因可能是紅細(xì)胞CR1基因組密度多態(tài)性分布異常所致。在臨床治療中，應(yīng)根據(jù)患兒紅細(xì)胞CR1基因組密度多態(tài)性分布的膜相表達(dá)，除常規(guī)治療外，用一些改善血紅細(xì)胞膜蛋白合成成分的治療方法，改善紅細(xì)胞CR1的基因結(jié)構(gòu)，提高紅細(xì)胞CR1的位點(diǎn)數(shù)量和活性，這也利于反復(fù)呼吸道感染患兒的臨床治療。

　　在本研究中我們發(fā)現(xiàn)反復(fù)呼吸道感染患兒的基礎(chǔ)免疫狀態(tài)是 IgG,IgA,IL|2,γ|IFN,CD+4,CD+4/CD+8,RIT,RBC|C3bRR明顯降低；CD+8,IgM,PCD,Fas,FasL,RBC|ICRR明顯升高，防感香袋治療后基礎(chǔ)免疫狀況有明顯改變，IL|2,IFN|γ，CD+4,CD+4/CD+8,RIT,RBC|C3bRR,IgA,IgG,PCD明顯升高；CD+8,IgM,PCD,Fas,FasL,RBC|ICRR均有不同程度的降低。防感香袋對(duì)反復(fù)呼吸道感染患兒有明顯的免疫調(diào)節(jié)作用，可提高患兒的免疫功能，研究證實(shí)防感香袋可作為反復(fù)呼吸道感染患兒的長(zhǎng)期免疫增強(qiáng)劑。

　　參考來源：《防感香袋對(duì)反復(fù)呼吸道感染患兒免疫調(diào)控的影響》紀(jì)戰(zhàn)尚，王湘茗*,蔣玉紅，《中醫(yī)兒科雜志》2010年第6卷第3期

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