液氮淺低溫冷凍對皮膚色素及黑色素細(xì)胞影響

　　我們用液氮淺低溫冷凍療法治療斑禿取得了滿意的療效 .其有效率及痊愈率高、見效快、無副作用、方法簡便等優(yōu)點(diǎn)，優(yōu)于斑禿的一般療法，而且用該法治療后的新生毛發(fā)為粗而黑的正常毛發(fā)，而非其它療法后長出的細(xì)、軟、色淡或白色的毳毛樣發(fā)。我們進(jìn)一步通過實(shí)驗(yàn)研究，證實(shí)了比與淺低溫冷凍刺激了黑色素細(xì)胞，使之?dāng)?shù)目增加和功能有增強(qiáng)有關(guān)。

　　目的：研究液氮淺低溫冷凍對皮膚色素及黑色素的影響。方法：用液氮淺低溫冷凍機(jī)直接接觸法和棉簽法冷凍。結(jié)果：顯示冷凍后家兔毛被黑而粗，與對照組不同，后者為細(xì)、軟、色淡的毳毛樣毛被，并且所有實(shí)驗(yàn)區(qū)伴有色素沉著，組織學(xué)顯示表皮黑色素顆粒和黑色素細(xì)胞數(shù)目顯著增多（P<0.001）。結(jié)論：淺低溫冷凍可增加黑色素細(xì)胞數(shù)目和促進(jìn)黑色素的合成，此為臨床上用該法治療斑禿和白癜風(fēng)提供了理論依據(jù)。

　　1 材料與方法

　　1.1 動物 體重1.5~2kg的健康成年黑色家兔24只，雌雄不限。

　　1.2 方法 實(shí)驗(yàn)組以接觸法和棉簽法隨機(jī)分為兩組進(jìn)行了冷凍，每組各10只，每只兔臀部剪毛后不冷凍作自身對照，另設(shè)對照組4只，背部剪毛后不予冷凍。

　　1.2.1 接觸法冷凍組 剪去兔背部毛被，以2%龍膽紫標(biāo)記出直徑2cm大小的實(shí)驗(yàn)區(qū)3處，用江蘇泰興電工器械廠生產(chǎn)的液氮冷凍治療機(jī)接以直徑1cm大小的冷凍頭，以直接接觸法冷凍已標(biāo)記好的實(shí)驗(yàn)區(qū)，從冷凍頭接觸兔皮開始計(jì)時，冷凍15s,凍融2次為1個周期。

　　1.2.2 棉簽法冷凍組 同樣剪毛后以棉簽蘸液氮涂擦實(shí)驗(yàn)區(qū)，使局部結(jié)一層簿霜（約1s），自然融化后再涂擦2次為一周期。對照組及自身對照區(qū)均剪毛后不予冷凍。

　　1.3 觀察項(xiàng)目 （1）于實(shí)驗(yàn)組冷凍后每日肉眼觀察各組局部皮膚及毛被色澤變化。（2）組織學(xué)檢查：于冷凍后2h、24h、48h、7d、14d分別切除實(shí)驗(yàn)組與對照組皮膚，以10%甲醛固定、石蠟包埋切片，HE染色作光鏡檢查。隨機(jī)觀察每組幾個視野的表皮黑色素顆粒的密度并計(jì)數(shù)黑色素細(xì)胞數(shù)目，做統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。

　　2 結(jié)果

　　2.1 局部皮膚及毛被色素變化

　　2.1.1 接觸法組 冷凍14d后，有2只兔在冷凍邊緣區(qū)長出數(shù)根粗而黑的毛，長約0.2cm,28d后，各冷凍區(qū)邊緣均布滿一圈又粗又黑的毛，長約0.4cm.50d左右冷凍區(qū)中央開始長出灰白色毛。80d左右冷凍區(qū)毛長至1cm以上，局部皮膚均出現(xiàn)深黑色色素沉著，冷凍區(qū)中央灰白色毛邊變?yōu)楹谏��?14d后皮膚色素沉著消退，毛被長至正常長度。

　　2.1.2 棉簽法組 冷凍后18d,一只兔在冷凍區(qū)散在地長出0.3cm之粗黑毛，23d左右，所有冷凍區(qū)均彌漫性地長出粗黑毛被，長約0.4cm,28d左右，局部皮膚出現(xiàn)色素沉著，49d以后，皮膚色素沉著漸消退，90d左右實(shí)驗(yàn)區(qū)毛被長度超過正常毛被長度。對照組及自身對照區(qū)：在實(shí)驗(yàn)組冷凍107d和114d左右始見有少量細(xì)軟灰黑色兔毛長出，長度0.2~0.3cm,速度緩慢，共有3處對照區(qū)皮膚出現(xiàn)小片狀色素沉著。

　　2.2 組織學(xué)改變 冷凍2h后，皮膚水腫，真皮淺層毛細(xì)血管擴(kuò)張、充血，并有嗜酸性細(xì)胞、淋巴細(xì)胞及少量漿細(xì)胞浸潤，24h達(dá)高峰，48h后上述反應(yīng)減輕。1周后組織水腫及細(xì)胞浸潤消退，表皮及毛囊上皮呈增生狀態(tài)，基底層色素顆粒及黑色素細(xì)胞數(shù)目增多，真皮毛細(xì)血管數(shù)目增多。皮膚色素沉著區(qū)活檢：基底層及部分棘層下部色素顆粒呈彌漫性分布，黑色素細(xì)胞數(shù)目顯著增多，遍及整個色素沉著區(qū)，與對照組形成鮮明對比P<0.001）。黑色素細(xì)胞形態(tài)與對照組差異無顯著性。

　　3 討論

　　黑色素細(xì)胞對冷凍較為敏感，冷凍-30℃以下，黑色素細(xì)胞即被破壞，故在人類，深低溫冷凍后形成的色素減退斑很少有色素恢復(fù)現(xiàn)象。Burge等研究了豚鼠皮膚深度冷凍后的色素變化和黑色素細(xì)胞的分布，發(fā)現(xiàn)冷凍1個月后，所有冷凍區(qū)中央出現(xiàn)了色素減退，周圍伴有一圈色素沉著區(qū)，光鏡下見色素減退區(qū)缺乏黑色素細(xì)胞，而色素沉著區(qū)，黑色素細(xì)胞數(shù)目顯著增加（P<0.001）。冷凍2個月后，色素漸從冷凍邊緣的色素沉著區(qū)擴(kuò)散至中央的色素減退區(qū)。3個月后，所有色素減退區(qū)出現(xiàn)了彌漫性色素沉著，光鏡下見黑色素細(xì)胞遍及整個彌漫性色素沉著區(qū)。電鏡下見這些黑色素細(xì)胞與鄰近正常皮膚的黑素細(xì)胞之超微結(jié)構(gòu)無明顯區(qū)別。因而筆者認(rèn)為：輕微的表皮損傷可增加黑色素細(xì)胞之合成和使以前多已陰性的黑色素細(xì)胞合成黑色素，而遷移至冷凍損害邊緣的黑色素細(xì)胞能耐受次致死冷凍劑量而合成大量的黑色素。

　　我們的實(shí)驗(yàn)結(jié)果與上述報(bào)道類似。不管是臨床上用淺低溫冷凍療法治療斑禿時，還是動物實(shí)驗(yàn)中，其新生毛發(fā)均粗而黑，而非同其它療法后長出的細(xì)軟、色淡或白色的毳毛樣發(fā)（本組接觸法組因冷凍劑量大于棉簽法，故中央?yún)^(qū)新生毛發(fā)細(xì)軟、色淡以后 才變?yōu)檎�常色澤）。同時，實(shí)驗(yàn)組在毛被生長過程 中，皮膚也伴隨著出現(xiàn)色素沉著，持續(xù)20~30d天方消退，組織學(xué)顯示冷凍組色素顆粒及黑色素細(xì)胞數(shù)目顯著增多（P<0.001）。 Tosti等發(fā)現(xiàn)，斑禿的毛囊受累、黑色素細(xì)胞也從毛球消失，故開始長出的毛發(fā)往往是白色或比原色澤為淡，這說明斑禿的黑色素細(xì)胞也是受損的。本試驗(yàn)進(jìn)一步證明：淺低溫冷凍能刺激黑色素細(xì)胞使之?dāng)?shù)目增加和功能增強(qiáng)，因而合成大量的黑色素。此為臨床上用該法治療斑禿及白癜風(fēng)提供了理論依據(jù)。

　　參考來源：《液氮淺低溫冷凍對皮膚色素及黑色素細(xì)胞影響的實(shí)驗(yàn)研究》楊 磊，聶意飛，廖端宇，張建明，李鴻業(yè)，《中華現(xiàn)代皮膚科學(xué)雜志》2004年9月第1卷第1期

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