阿維A聯合窄譜中波紫外線對尋常型銀屑病皮損中Bcl-2、Caspase-3、Survivin的調節作用

　　銀屑病是一種多基因遺傳性皮膚病，具體發病機制不明，治療困難，易復發。臨床中阿維A聯合窄譜中波紫外線（NB-UVB）是治療銀屑病的常用方法，且療效顯著。本研究應用免疫組化方法檢測尋常型銀屑病經阿維A聯合NB-UVB治療前后皮損中Bcl-2、Caspase-3、Survivin的表達，以期探討上述治療方法在尋常型銀屑病角質形成細胞凋亡調節中的可能作用。

　　目的：探討阿維A聯合窄譜中波紫外線（NB-UVB）在尋常型銀屑病角質形成細胞凋亡中的可能作用。方法：20例正常皮膚組織，30例尋常型銀屑病患者給予阿維A聯合NB-UVB治療，療程8周，取治療前后標本，用免疫組化方法檢測正常皮膚及治療前后皮損的Bcl-2、 Caspase-3、 Survivin的表達情況，并進行統計學分析。結果：和正常皮膚比較，尋常型銀屑病皮損中Bcl-2低表達，Caspase-3、 Survivin高表達（P<0.01），治療后Bcl-2表達上調，Caspase-3、Survivin表達下調（P<0.01），三者均有向其在正常組織表達狀況轉化的趨勢。結論：阿維A聯合NB-UVB可能通過調節Bcl-2、Caspase-3、Survivin的表達而調節角質形成細胞的凋亡達到治療目的。

　　1 資料與方法

　　1.1 一般資料

　　30例尋常型銀屑病患者，男18例，女12例；病程1個月~10年，均來自我科門診及病房，均經病理證實診斷且無治療禁忌癥。治療前取標本并固定、包埋。給予阿維A （方希，重慶華邦制藥股份有限公司）聯合NB-UVB治療，口服阿維A 30 mg/d,病情好轉后改為10~20 mg/d,同時患者接受311 nm NB-UVB治療（SS-03B型紫外線光療儀，上海希格瑪高技術有限公司），皮損處照射，初始劑量為0.15 J/cm2,每周2次，每次劑量遞增0.03 J/cm2,最大劑量達0.8 J/cm2.8周后環鉆取治療后皮損標本，甲醛固定，石蠟包埋。對照組20例皆取自我院整形外科手術切除的正常人皮膚。

　　1.2 試驗試劑

　　鼠抗人多克隆抗體Bcl-2、Caspase-3 ,兔抗人多克隆抗體Survivin,SP免疫組化染色試劑盒（即用型）及DAB顯色劑等。

　　1.3 檢測方法

　　采用SP免疫組化法進行檢測，按產品使用說明書操作，二氨基聯苯胺（DAB）顯色，蘇木素復染，脫水，透明，封片后光鏡下觀察并攝片。用乳腺癌組織做陽性對照，陰性對照滴加PBS液代替一抗。

　　1.4 結果判定

　　切片標本中可見胞漿或胞核內出現棕黃或棕褐色均勻分布的顆粒狀沉積物為陽性細胞，Bcl-2蛋白陽性反應均定位在細胞核；Caspase-3陽性反應定位在細胞漿及細胞核內；Survivin蛋白陽性反應均定位在細胞漿及細胞核內。陽性細胞計數以在40×10倍顯微鏡下，每一切片取5個不同視野，計數平均每一高倍視野中的陽性細胞數列入分析[1].

　　1.5 統計學分析

　　應用SPSS 11.5統計軟件，計量資料以x-±s表示，采用t檢驗，P<0.05為差異有統計學意義。

　　2 結果

　　與正常組織比較，尋常型銀屑病治療前皮損中Bcl-2低表達（t=39.884,P=0.000），Caspase-3（t=50.225,P=0.000）、Survivin（t=21.434,P=0.000）呈高表達；阿維A聯合NB-UVB治療后尋常型銀屑病皮損中Bcl-2表達由治療前（6.20±1.63）上調至治療后（12.23±2.06）（t=14.39,P=0.000），Caspase-3表達由治療前（21.07±3.14）下調至治療后（10.07±2.13）（t=22.83,P=0.000），Survivin表達由治療前（22.97±3.03）下調至治療后（12.63±2.61）（t=16.76,P=0.000）。見表1.治療前后3種蛋白的表達情況見圖1~6.經治療PASI評分由治療前（14.26±3.48）降至治療后（4.12±1.53），差異有統計學意義（t=14.628,P=0.000）。表1 阿維A治療前后皮損中3種蛋白表達比較 圖1 治療前Bcl-2低表達 （SP×400），圖2 治療后Bcl-2表達上調（SP×400）圖3 治療前Caspase-3高表達（SP×400），圖4 治療后Caspase-3表達下調（SP×400）

　　3 討論

　　目前認為，Caspase家族、Bcl-2基因家族是凋亡信號調控圖5 治療前Survivin高表達（SP×400），圖6 治療后Survivin表達下調（SP×400）中的2個關鍵因素，Survivin是凋亡抑制蛋白家族的新成員。有研究表明Bcl-2蛋白抑制細胞凋亡，延長細胞的生存時間，而不能促進細胞增殖；Caspase-3是細胞凋亡過程中的主要效應因子； Survivin具有抑制凋亡和促進細胞有絲分裂的作用。

　　維甲酸能夠誘導多種腫瘤細胞凋亡，調節腫瘤細胞的生長、分化，具有顯著抗腫瘤作用[2,3].阿維A主要基于對細胞增殖和分化的調控作用，能影響核苷酸轉錄過程，抑制DNA合成和細胞增殖[4].文獻報道，全反式維甲酸（all-trans retinoic acid,ATRA）作用于人食管癌及胰腺癌細胞株后，細胞株的生長被抑制的同時，Survivin的表達均下調[5,6].近年來， NB-UVB被廣泛地應用于臨床治療白癜風、銀屑病、特應性皮炎及其它皮膚病，并取得了較好的療效。表皮的黑素細胞、角質形成細胞均是NB-UVB輻射的主要靶細胞。NB-UVB照射后可使正常皮膚發生角化不良、棘層肥厚、海綿形成、炎癥細胞浸潤，這些表明NB-UVB照射可影響角質形成細胞的增殖和分化[7].

　　本研究發現，尋常型銀屑病經阿維A聯合NB-UVB治療后Bcl-2表達上調，Caspase-3、Survivin表達下調。治療后Bcl-2表達增高，延長了角質形成細胞的生存期，Caspase-3表達下調，抑制了角質形成細胞的凋亡，從而使尋常型銀屑病皮損的表皮通過時間延長，達到治療效果；經治療Survivin表達的下調，抑制了角質形成細胞異常的有絲分裂，減少角質形成細胞增殖。

　　由此推測Bcl-2、Caspase-3、Survivin在尋常型銀屑病的發病中可能起一定作用，阿維A聯合NB-UVB可能通過調節Bcl-2、Caspase-3、Survivin的表達來調節角質形成細胞的凋亡而達到治療目的，由于病例數有限，其機制有待進一步研究。

　　（參考來源：《阿維A聯合窄譜中波紫外線對尋常型銀屑病皮損中Bcl-2、Caspase-3、Survivin的調節作用》秦蘭英 邢衛斌 葉文靜 趙子申 付國俊，《河北醫藥》2011年8月33卷16期）。

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