尖銳濕疣皮損區(qū)的免疫狀態(tài)與免疫治療療效的關(guān)系

    【摘要】  目的 研究尖銳濕疣患者皮損區(qū)的免疫狀態(tài)與免疫治療療效的關(guān)系。方法  觀察5%咪喹莫特乳膏治療3O例尖銳濕疣的臨床療效，并采用免疫組化方法檢測(cè)治療前皮損區(qū)人類(lèi)白細(xì)胞抗原-DR(HLA-DR)、CDla、CD16、細(xì)胞間粘附分子-1(ICAM-1)的表達(dá)。結(jié)果 治療后8周，2O例(66.7)患者有效。咪喹莫特治療有效者，治療前其皮損HLA-DR、CDla、CD16及 ICAM-1陽(yáng)性表達(dá)明顯多于無(wú)效者(P<0.05)。結(jié)論  尖銳濕疣皮損處HLA-DR、CDla、CD16及ICAM-1陽(yáng)性表達(dá)多者提示免疫治療有效。

 

    尖銳濕疣是人乳頭瘤病毒(HPV)感染引起的一種性傳播疾病，其自然病程個(gè)體差異很大，一般認(rèn)為其發(fā)生、轉(zhuǎn)歸與機(jī)體的免疫狀態(tài)有關(guān)，因此臨床上常采取免疫調(diào)節(jié)治療。然而，患者對(duì)免疫治療的反應(yīng)亦存在個(gè)體差異。樹(shù)突狀細(xì)胞、自然殺傷細(xì)胞(NK細(xì)胞)及粘附分子參與了皮膚的免疫應(yīng)答。為了進(jìn)一步研究尖銳濕疣患者的免疫狀態(tài)及其與免疫治療的關(guān)系，我們觀察了5%咪喹莫特乳膏治療尖銳濕疣的臨床療效，并檢測(cè)了尖銳濕疣皮損區(qū)人類(lèi)白細(xì)胞抗原-DR(HLA-DR)、CDla、CD16、細(xì)胞 間粘附分子-1(ICAM-1)表達(dá)的情況。

 

    1.1 研究對(duì)象及治療方法

    30例尖銳濕疣患者，來(lái)自我科門(mén)診，男19例，女11例，年齡21～60歲，平均36.5歲，病程15 d至90 d，平均26 d。治療前取疣體活檢。治療方法：用5%咪喹莫特乳膏(商品名明欣利迪，四川明欣藥業(yè)有限公司生產(chǎn))，涂一薄層于外生殖器和肛周尖銳濕疣皮損處，按摩數(shù)次，每周3次，療程8周。在試驗(yàn)期間禁止使用抗病毒藥和其它免疫調(diào)節(jié)劑。

 

    1.2 免疫組化方法

    免疫組化法采用標(biāo)準(zhǔn)SP法染色。HLA-DR、CD1a、CD16、ICAM-1單克隆抗體為美國(guó) Santa Cruz公司產(chǎn)品。抗體稀釋度均為1：100。主要操作步驟：切片裱于經(jīng)APES處理的清潔載玻片上，置60℃孵箱烤4～6h，常規(guī)脫蠟水化，滴加第一抗體，37℃，1 h。滴加生物素標(biāo)記的二抗，37℃，30 min。滴加過(guò)氧化酶標(biāo)記的鏈親合素，37℃，30 min后DAB顯色，蘇木素復(fù)染封片。以上各步間均用 0．01 mol／L PBS(pH 7.4)沖洗3次，每次5 min。以正常淋巴組織作陽(yáng)性對(duì)照，空白對(duì)照以PBS代替一抗，余同前。

 

    1.3 結(jié)果判斷

 

    判斷標(biāo)準(zhǔn)參見(jiàn)文獻(xiàn)^[1]。臨床療效：療效指標(biāo)為疣件的數(shù) 目和總面積，按照痊愈、顯效、進(jìn)步、無(wú)教四級(jí)標(biāo)準(zhǔn)評(píng)價(jià)。痊愈：疣體完全消退；顯效：60%≤疣體面積減少<1O0%；進(jìn)步：2O%≤疣體面積減少<60%；無(wú)效：疣體面積減少<20%或繼續(xù)加重。將痊愈和顯效病例合計(jì)計(jì)算有效率。

 

    免疫組化結(jié)果判定：以染色強(qiáng)度和染色范圍之和為每種標(biāo)記的總分?jǐn)?shù)。染色強(qiáng)度：0分為無(wú)染色；1分為弱陽(yáng)性；2分為中等度陽(yáng)性；3分為強(qiáng)陽(yáng)性。染色范圍：0分為偶見(jiàn)陽(yáng)性；1分為片狀陽(yáng)性；2分為廣泛陽(yáng)性。

 

    1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

    采用 Wilcoxon秩和檢驗(yàn)，雙側(cè)。a＝0.05為檢驗(yàn)水準(zhǔn)。

 

    2.1 臨床療效

    治療后8周，15例患者痊愈，5例顯效，痊愈率為50%，有效率為66.7%。

 

    2 2 皮損 逸 HLA—DR、CDIa CDI6、ICAM 1的表達(dá)

 

    HLA-DR、CDla、ICAM-1陽(yáng)性細(xì)胞主要分布于表皮棘細(xì)胞層和基底層，陽(yáng)性表進(jìn)部位位于細(xì)胞膜或細(xì)胞漿；CD1 6陽(yáng)性細(xì)胞位于真皮層，表達(dá)部位在細(xì)胞膜(圖1～4)咪喹奠特治療有效者，治療前其皮損區(qū)HLA-DR、CDla、CD16及ICAM-1陽(yáng)性表達(dá)明顯多于無(wú)效者，見(jiàn)附表。

 

    圖1 尖銳濕疣皮損區(qū)HLA-DR陽(yáng)性樹(shù)突狀細(xì)胞位于表皮基底層和棘細(xì)胞層，表達(dá)部位在細(xì)胞膜/細(xì)胞漿。SP×400

 

    圖2 尖銳濕疣皮損區(qū)CD1a陽(yáng)性樹(shù)突狀細(xì)胞位于表皮基底層和棘細(xì)胞層，表達(dá)部位在細(xì)胞膜/細(xì)胞漿。SP×400

 

    圖3 尖銳濕疣皮損區(qū)CD16陽(yáng)性細(xì)胞位于真皮層，表達(dá)部位在細(xì)胞膜。SP×400

 

    圖4 ICAM-1在尖銳濕疣表皮基底層和棘細(xì)胞層的角質(zhì)形成細(xì)胞胞膜陽(yáng)性表達(dá)。SP×400

 

      A: Responders to imiquimod; B: Monresponders to imiquimod

 

    附表  咪喹莫特治療尖銳濕疣有效者和無(wú)效者各標(biāo)記染色分?jǐn)?shù)的比較

 

 

 

    咪喹莫特是一種人工合成的新型的免疫調(diào)節(jié)劑，可誘導(dǎo)人單核細(xì)胞、樹(shù)突狀細(xì)胞和角質(zhì)形成細(xì)胞產(chǎn)生干擾素(IFN)-a、腫瘤壞死因子(TNF)-a和白介素 IL-1、IL-6、IL-8、IL-12，刺激機(jī)體的免疫系統(tǒng)發(fā)生針對(duì)感染 HPV細(xì)胞的Thl型免疫應(yīng)答，最終清除感染的病毒^[2]。HLA-DR及 CDla都是樹(shù)突狀細(xì)胞的表面標(biāo)志。樹(shù)突狀細(xì)胞是表皮中至關(guān)重要的抗原遞呈細(xì)胞，并參與細(xì)胞激活和免疫監(jiān)視^[3]。有研究^[4]表明，尖銳濕疣患者存在局部免疫缺陷，表現(xiàn)為皮損部位 CD4、CDla陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)目減少。本研究發(fā)現(xiàn)，瞇喹莫特治療有效者，治療前其皮損 HLA-DR、CDla陽(yáng)性表達(dá)明顯多于無(wú)效者，與文獻(xiàn)報(bào)道^[5，6]其它的免疫調(diào)節(jié)劑如干擾素、疫苗結(jié)果相似。對(duì)于咪喹莫特治療抵抗者，由于抗原遞呈細(xì)胞的低密度，導(dǎo)致在咪喹莫特治療時(shí)細(xì)胞因子生成不足，難以激活局部的免疫反應(yīng)，故治療無(wú)效^[7]。

 

    CD16是人類(lèi)NK細(xì)胞 的表面標(biāo)志。NK細(xì)胞是天然免疫和獲得免疫的效應(yīng)細(xì)胞，其表面的膜蛋白CD16有細(xì)胞粘附作用。NK細(xì)胞借助其表面的CD16，結(jié)合并殺傷靶細(xì)胞(病毒感染細(xì)胞)。NK細(xì)胞還可釋放r-干擾素、TNF-a、IL-1等細(xì)胞因子，調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答。病毒可激活NK細(xì)胞。有研究^[4，6]表明，尖銳濕疣患者存在局部免疫缺陷，其皮損部位CD16陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)目減少；干擾素治療有效者的皮損處CD16陽(yáng)性細(xì)胞明顯多于無(wú)效者。本研究發(fā)現(xiàn)，咪喹莫特治療有效者，治療前其皮損CD16陽(yáng)性表達(dá)明顯多于無(wú)效者，提示在尖銳濕疣患者，HPV不能有效激活NK細(xì)胞以及相應(yīng)的免疫應(yīng)答，對(duì)HPV感染細(xì)胞的殺傷能力較弱，從而導(dǎo)致尖銳濕疣皮損的出現(xiàn)并持續(xù)存在，免疫治療難以奏效。

 

    ICAM-1(CD54)屬于免疫球蛋白超家族。正常情況下，ICAM-1很少表達(dá)或不表達(dá)。受到炎性細(xì)胞因子如 TNF-a等的刺激時(shí)，可表達(dá)于多種細(xì)胞表面例如活化的T細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、表皮角質(zhì)形成細(xì)胞，參與免疫應(yīng)答和免疫調(diào)節(jié)以及炎癥反應(yīng)，并參與免疫細(xì)胞識(shí)別和調(diào)節(jié)細(xì)胞凋亡^[3]。咪喹莫特治療有效者，治療前其皮損ICAM-1陽(yáng)性細(xì)胞明顯多于無(wú)效者。皮損區(qū)ICAM-1表達(dá)的上調(diào)可促進(jìn)白細(xì)胞移行至血管外，粘附于角質(zhì)形成細(xì)胞，并且通過(guò)與淋巴細(xì)胞功能相關(guān)抗原-1(LFA-1)相互作用活化T淋巴細(xì)胞 。

 

    綜上，咪喹莫特治療尖銳濕疣有效者的皮損區(qū)HLA-DR、CD1a、CD16及ICAM-1陽(yáng)性表達(dá)明顯多于無(wú)效者，提示 局部皮損處 HLA-DR、CDla、CD16及 ICAM-1陽(yáng)性表達(dá)多的尖銳濕疣患者對(duì)免疫治療有效。

   

    1  Coleman N ·Birley HDL，Renton AM ，et a1．Immunological events in regressing genital warts．Am J Clin Patho1．1998 I 102 (6)t768．

 

    2  Sauder DN． Immunomod ulatory and pharmacologic properties of imiquimod． J Am Acad Dermatol。2000；43(1)lS6．

 

    3  龔非力主編．基礎(chǔ)免疫學(xué)．武漢：湖北科學(xué)技術(shù)出版社。1998： 24-173．

 

    4  Arany I,Evans T, Tyring SK．Tissue specific HPV expression and d0wnreguIati0n of local immune responses in condylomas from HIV seropositive individuals．Sex Transm Infect，1998 l 74(5)t349．

 

    5  Davidson EJ, Boswell CM, Sehr P,et a1．Immunological and clinical responses in women with vulval intraepithelial neoplasia vaccinated with a vaccinia virus encoding human papillomavirus 16／18 oncoproteins．Cancer Res,2003I63(18)l 6032．

 

    6  Arany I．Tyring SK．Activation of local cell-mediated immunity in interferon-responsive patients with human papillomavirus-associated lesions． J Interferon Cytokine Res,1996I16(6)l453．

 

    7  Arrese J,Paquet P,Claessens N,et a1．Dermal dendritic cells in anogenital warty lesions unresponsive to an immune—response modifier．J Cutan Pathol,2001,28(3) 131．