金天格膠囊對(duì)成骨細(xì)胞作用的臨床研究

    骨質(zhì)疏松癥是一種以骨強(qiáng)度受損為特征的骨骼疾病。其病因很多，最終結(jié)果為成骨過(guò)程低于破骨過(guò)程，骨量和骨質(zhì)量下降。成骨細(xì)胞是骨質(zhì)生發(fā)、形成的物質(zhì)基礎(chǔ)，只有其不斷的分裂增殖才可以產(chǎn)生豐富的膠原基質(zhì)，通過(guò)礦化作用形成更多骨質(zhì)。金天格膠囊的主要成份為人工虎骨粉。本研究觀察金天格膠囊對(duì)成骨細(xì)胞的影響，探討其對(duì)成骨細(xì)胞作用的機(jī)理。 

    主要研究方向：骨質(zhì)疏松的診斷與治療，的MEM 培養(yǎng)液重懸細(xì)胞，接種于75cm~75cm培養(yǎng)瓶，于37℃，25％CO 條件下培養(yǎng)，次日換液棄去懸浮細(xì)胞，每隔兩日換液1次；消化后的骨碎片可貼于25cm~25cm培養(yǎng)瓶壁(25—40個(gè)碎骨粒／瓶)，加入含15％ PBS的MEM 培養(yǎng)液，37~C，25％CO 條件下培養(yǎng)，l周后換液，以后隔兩日換液1次，即得到酶消化法及骨片貼附法所獲得的人成骨樣細(xì)胞(HOB)。 

    應(yīng)用金天格膠囊(金花企業(yè)股份有限公司高新制藥廠生產(chǎn))lg，加入含l5％PBS的MEM培養(yǎng)液(pH值為7．3．7．4，過(guò)濾除菌)lOml中，用0．451~m濾器除菌，配成濃度為0．1g／ml的溶液。依上法可配制成濃度為5p~g／ml、10l~g／ml、20~g／ml的金天格膠囊藥液。 

    將處于生長(zhǎng)旺盛的人成骨樣細(xì)胞(HOB)，接種于25cm~25cm培養(yǎng)瓶(第2代)，用無(wú)酚紅MEM 培養(yǎng)液(含15％PBS、VitC50~g／ml、青霉素50U／ml、慶大霉素50~g／m1)培養(yǎng)，取細(xì)胞
懸液加到24孔板上，每孔lml。放人37~C培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。待細(xì)胞貼壁后，第2天加入配好的金天格膠囊藥液。 

    統(tǒng)計(jì)方法：定量指標(biāo)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示。采用x 檢驗(yàn)或t檢驗(yàn)，P<0．05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 

    金天格膠囊藥液可以明顯刺激成骨細(xì)胞的增殖，與不用藥組對(duì)比有顯著差異，并隨藥物濃度的增加，成骨細(xì)胞數(shù)明顯增多(P<0．05)；反映成骨細(xì)胞活性的AKP、BGP隨藥物濃度的增加也相應(yīng)升高，與不用藥組對(duì)比有顯著差異(P<0．05)；反映破骨細(xì)胞活性的PYD則隨藥物濃度的增加而相應(yīng)下降，與不用藥組對(duì)比有顯著差異(P<0．05 o 

    成骨細(xì)胞是參與骨代謝的重要細(xì)胞，它與破骨細(xì)胞共同維持著骨代謝重建的平衡。骨質(zhì)疏松發(fā)生的機(jī)理是骨形成落后于骨溶解，在骨的重建過(guò)程中無(wú)法完全修復(fù)破壞的骨質(zhì)，使其骨量不斷減少、骨質(zhì)量下降。因此，治療骨質(zhì)疏松的關(guān)鍵是促進(jìn)成骨細(xì)胞的成骨過(guò)程，緩解破骨細(xì)胞的破骨過(guò)程。本研究成功培養(yǎng)出HOB。堿性磷酸酶染色陽(yáng)性細(xì)胞計(jì)數(shù)可直接代表該細(xì)胞群的數(shù)量與純度。 

    本研究聯(lián)合檢測(cè)金天格膠囊藥液干預(yù)試驗(yàn)后的AKP、BGP、PYD的含量并進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)，結(jié)果表明加藥后細(xì)胞數(shù)隨藥物濃度增加而增加，AKP、BGP水平也相應(yīng)提高，Ⅲ組的AKP、BGP水平較I組和II組增加明顯，與不用藥組對(duì)比存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0．05)，說(shuō)明金天格膠囊有直接刺激成骨細(xì)胞增殖及加強(qiáng)其活性的作用，并且提高金天格膠囊的濃度(用量)有利于藥效的發(fā)揮。再者，標(biāo)本檢測(cè)中發(fā)現(xiàn)的PYD，可能是成骨細(xì)胞傳代過(guò)程中部分細(xì)胞破壞，釋放某種物質(zhì)降解膠原產(chǎn)生的，本研究顯示加大金天格膠囊藥液的濃度可使培養(yǎng)液中PYD的濃度下降(P<0．05)，這說(shuō)明金天格膠囊也有抑制破骨的作用。 

    (本文節(jié)選自《金天格膠囊對(duì)成骨細(xì)胞作用的研究》)

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