水飛薊素磷脂酰膽堿復合物對實驗性肝損傷的保護作用

   水飛薊素(silymarin ,SIL)是天然的黃酮木脂素類化合物,以往研究表明其具有穩定細胞膜、改善肝功能的作用，對急慢性肝炎、肝硬化和代謝中毒肝損傷有一定的療效。但其結構特點決定了其口服吸收不完全，生物利用度較低。已有文獻報道磷脂酰膽堿（phosphatidylchlide,PC）可與黃酮類化合物通過絡合反應生成復合物，復合物的生成可改變黃酮類藥物的溶解性能，增強其在胃腸道中的吸收，提高藥物的生物利用度。本實驗觀察國產水飛薊素磷脂酰膽堿復合物（silymarin phosphatidylcholide complex,SIL-PC）對肝損傷的保護作用，并與市售的復合物組成成分SIP（商品名益肝靈片）進行比較，為SIL-PC臨床應用提供藥效學依據。

 

1．1  藥物與試劑   SIL-PC，由SIL與PC絡合反應而成，批號：020402，武漢俊源醫藥研究所提供。益肝靈片，北京第四制藥廠，規格：每片38.5mg。PC，四川英格爾公司。四氯化碳（CCl₄），南京化學試劑廠。D-氨基半乳糖（D-Galn），Merck公司。脂多糖（LPS），Sigma公司�？ń槊纾˙CG），衛生部上海生物制品研究所。AST，ALT試劑盒，南京建成生物工程研究所。

 

2．1  CCl₄肝損傷模型  小鼠80只，隨機分為8組：正常對照組，CCl₄模型組，SIL-PC30，100，300mg·kg^-1組（劑量以SIL計，下同），SIL30，300mg·kg^-1組，PC480mg·kg^-1組（相當于300mg·kg^-1SIL-PC中PC的量）。動物ig給藥，qd，連續3d。第2次給藥同時，正常組ip10mL·kg^-1。末次給藥后6h，小鼠摘眼球取血清，測定ALT和AST含量。

2．2  D-Galn肝損傷模型  小鼠70只，隨機分為7組：正常對照組，D-Galn模型組，SIL-PC 400和800 mg·kg^-1組，SIL400和800 mg·kg^-1組，PC1280 mg·kg^-1組。正常組ip10mL·kg^-1生理氯化鈉溶液，余下各組ip D-Galn 800 mg·kg^-1。給藥組在ip D-Galn前后4h各ig給藥1次，末次給藥后20h，取血清測定ALT和AST含量。

2．3  免疫性肝損傷模型  小鼠90只，隨機分為9組：正常對照組，BCG模型組，SIL-PC 100，200，400和800 mg·kg^-1組，SIL100和800 mg·kg^-1組，PC1280 mg·kg^-1組，正常組小鼠每只iv0.2mL生理氯化鈉溶液，余下各組iv0.2mLBCG（含6×10⁷個活菌）。次日起開始ig給藥，qd，d10每鼠ivLPS10μg，10h后，小鼠摘眼球取血清，測定ALT和AST含量。

 

實驗數據以x±s表示，組間比較采用t檢驗，p<0.05表示差異有顯著性。

 

ig給予SIL-PC30，100，300 mg·kg^-1，連續3d，可劑量依賴性降低小鼠血清AST，ALT活性，且100，300 mg·kg^-1組與CCl₄模型組比較，差異具有顯著性（P<0.05或P<0.01）。但SIL（30或300 mg·kg^-1）組及PC組小鼠血清AST，ALT活性與CCl₄模型組比較，差異無顯著性（P<0.05）。且SIL-PC 300 mg·kg^-1組作用明顯強于SIL 300 mg·kg^-1組（P<0.01），見表1。

表1 SIL-PC對CCl₄肝損傷小鼠的保護作用

Tab 1 The protective effects of SIL-PC against CCl₄-induced

 

 

 

Liver damage in mice          n=10,x±s

 

組別            劑量/mg·kg^-1            AST/u·L^-1            ALT/ u·L^-1

 

對照組             —                   101.5±11.2            25.6±4.9

模型組             —                   327.8±83.5^a           103.4±26.8^a

SIL-PC             30                   265.1±78.3           110.3±30.4

SIL-PC            100                   241.8±67.1^b           85.6±32.9

SIL-PC            300                   151.3±46.5^c           49.6±18.5^cd

SIL                30                    294.6±47.9           95.3±30.5

SIL               300                    258.3±57.1            89.6±32.3

PC                480                    294.3±67.1            99.8±30.5

 

與對照組比較，a：P<0.01；與模型組比較， b：P<0.05，c：P<0.01；與相同劑量SIL組比較，d：P<0.01（下同）

ig給予SIL-PC400和800 mg·kg^-1，分別使肝損傷小鼠AST下降約24%和61%（P<0.01）；ALT下降約32%（P<0.05）和43%（P<0.01）。SIL800 mg·kg^-1組小鼠血清AST和ALT活性與D-Galn模型組比較，差異具有顯著性（P<0.05），但SIL-PC作用明顯強于SIL（P<0.01）。

表2  SIL-PC對D-Galn肝損傷小鼠的保護作用

Tab 2 The protective effects of SIL-PC against D-Galn-induced

Liver damage in mice

 

組別            劑量/mg·kg^-1            AST/u·L^-1            ALT/ u·L^-1

 

對照組             —                97.3±6.8               31.2±5.1

模型組             —                2307.5±684.3^a          986.3±327.5^a

SIL-PC            400                1746.5±496.5           668.1±236.4^b

SIL-PC            800                896.4±457.6^cd          458.6±241.8^cd

SIL               400                1886.5±503.2           785.4±280.1

SIL               800                1703.5±357.2^b          714.5±224.9^b

PC               1280                2158.9±796.3           1127.5±411.5

 

ig給予SIL-PC100~800 mg·kg^-1，SK可劑量依賴性降低免疫性肝損傷小鼠血清AST，ALT活性（P<0.05或P<0.01），且相同劑量的SIL-PC降低血清AST，ALT活性作用明顯強于SIL（P<0.05或P<0.01），結果見表3。

表3 SIL-PC對免疫性肝損傷小鼠的保護作用

Tab 3 The protective effects of SIL-PC against

immunologic liver damage in mice

 

組別            劑量/mg·kg^-1            AST/u·L^-1            ALT/ u·L^-1

 

對照組             —                   89.5±9.4            27.5±9.3

模型組             —                   209.6±74.2^a         147.6±33.8^a

SIL-PC            100                   186.7±40.5          117.6±21.5b

SIL-PC            200                   165.2±38.1          86.3±22.8c

SIL-PC            400                   140.5±27.6^c         60.4±19.5^c

SIL-PC            800                   86.3±25.4cd         47.6±18.1^cd

SIL               100                   184.3±32.9          125.6±27.5

SIL               800                   146.4±30.8b         75.4±20.2c

PC               1280                   217.6±67.1          138.5±40.2

 

 

    SIL是天然的黃酮木脂素類化合物，具有抑制脂質過氧化，維持細胞膜穩定性等作用。PC為體內細胞的基本組成物質，與細胞膜的親和力強，在一定條件下，可與黃酮類化合物絡合，形成一種全新的復合化合物，復合化合物以PC為載體，使黃酮類化合物容易通過細胞的脂質膜。本結果顯示：ig給藥，SIL-PC在30~800 mg·kg^-1劑量范圍內，對CCl₄，D-Galn及小鼠免疫性肝損傷均有顯著的保護作用，且具有明顯的量效關系，但在同樣的試驗條件下，相應劑量的其組成成分SIL及PC的保肝作用明顯弱于SIL-PC 或未見保肝效應，從而從藥效學方面證實了小鼠口服SIL-PC，提高了SIL的生物利用度，為SIL-PC臨床應用提供了理論依據。