劉亞明,牛 欣,馮前進,王世民,曹月英

( 北京中醫藥大學, 北京 100029, 1 山西中醫學院, 太原 030024,2 山西省中醫藥研究院, 太原 030012)

提 要 本文對老年小鼠灌服龜齡集0. 125g/ kg、0 . 25g/ kg 和黨參0. 5g/ kg 50 天, 測定SOD, MDA、GSH- PX、NA 和DA, 結果顯示, 龜齡集能明顯提高老年小鼠SOD 和GSH- Px 的含量, 減少MDA 含量, 龜齡集還能明顯增加老年小鼠單胺類神經遞質的含量,表明龜齡集有抗衰老作用。 

關鍵詞 龜齡集; 抗氧化; NE; DA

龜齡集有增強小鼠免疫功能, 促進性激素、腎上腺皮質激素合成, 促進小鼠RNA、蛋白質合成, 增加心血排出量, 抗疲勞、抗缺氧和保肝等作用。我們發現龜齡集有顯著的抗脂質過氧化作用, 為了進一步觀察龜齡集的抗衰老作用及機理, 本文對老年小鼠中樞神經遞質去甲腎上腺素( NE) 、多巴胺( DA)及SOD、GSH- Px、MDA 含量進行了測定, 現將結果報道如下。

1 材料

1. 1 試驗藥物龜齡集散劑, 山西中藥廠產, 批號990713。

1. 2 動物 昆明種小鼠, 體重33 ? 2g , 雌雄各半, 由山西省中醫藥研究院實驗動物中心提供。

1. 3 試劑 去甲腎上腺素( NB) 重酒石酸鹽( 中國藥品生物制品檢定所, 批號9402) ; 多巴胺( DA) 鹽酸鹽( 中國藥品生物制品檢定所, 批號9404) ; SOD 試劑盒、MDA 試劑盒、GSH- Px 試劑盒( 均購自南京建成生物工程研究所, 批號990828) 。

1. 4 儀器 高效液相色譜儀LC- 10Avp 系列( 日本島津) , LECD-6A 電化學檢測器。

1. 5 方法

1. 5. 1 標準液配制 取去甲腎上腺素( NE) 、多巴胺( DA) 標準液分別配成濃度為1g / L 的標準液, 貯存于- 20 e 冰箱內, 分析時配成濃度為0. 1mg/ L 的應試液。

1. 5. 2 色譜測定條件 熒光檢測激發波長設置為280nm, 發射波長設置為315nm, 室溫保持在25e 左右, 以峰面積定量計算。并建立標準品的分離色譜圖及NE、DA 工作曲線及線性方程式。

1. 5. 3 分組與測定 將老年小鼠( 3 月齡) 50 只, 隨機分5 組:即老齡組, 龜齡集小、中劑量組和黨參組。另取10 只( 1. 5 月齡) 小鼠為對照組。小鼠每日灌服蒸溜水或藥物飼養50d。處死小鼠取血分離血清參照文獻[ 3] 方法分別進行小鼠MDA、SOD及GSH- Px 含量測定。另將動物斷頭置于冰臺上, 迅速取出腦組織并快速保存于液氮中備測。另將小鼠全腦( 除去小腦) 稱重后, 放入含0. 5mol/ L EDTA、0. 01% 半胱氨酸的0. 4mmol/ LHClO4 冷溶液中勻漿, 于4e 10000g 離心10mmin。取上清液與1/ 2 體積的鉀鹽溶液混合, 冰溶液中靜置10min。進樣前用0.45Lm 的濾膜過濾, 10000g 高速離心10min, 取上清液20Ll 測定NE、DA 含量。

2 結果

龜齡集對老年小鼠血清中MDA、SOD 及GSH- Px 含量的影響見表1。

3 討論

脂質過氧化是指機體代謝產生的自由基誘導生物膜中不飽和脂肪酸發生氧化反應, 形成過氧化產物MDA。衰老可使細胞膜磷脂分子產生脂質過氧化。MDA 能使膜蛋白、酶發生交聯反應, 使膜通透性增加, 導致細胞膜結構、功能和代謝發生改變,對機體造成損害。血清MDA 含量多少能反映細胞膜脂質過氧化的強弱, 龜齡集能明顯抑制衰老動物血清MDA 生成和明顯。

降低衰老小鼠血清MDA 含量, 表明具有抗脂質過氧化作用。另外已知自由基( 超氧離子自由基和羥自由基) 是啟動脂質過氧化的關鍵因素, GSH- Px 作為一種抗氧化與抗自由基物質, 其含量越下降細胞衰老程度就越嚴重。SOD 是超氧陰離子自由基的清除劑, 可抑制自由基啟動的脂質過氧化反應。龜齡集可明顯提高衰老小鼠血清SOD 含量及GSH- Px 含量, 這一結果與我們以往的報告相似[ 3] , 表明龜齡集具有顯著的抗脂質過氧化作用。

一般認為NE 和DA 的合成是腎上腺素能神經元攝取血中的酪氨酸為原料, 在胞漿內首先羥化成多巴, 再脫羥生成多巴胺, 然后進入囊泡, 經B- 羥化而生成NE。當腦內NE、DA 含量下降時則表明腦功能衰退。同時由于衰老動物的消化功能減退而使DA、NE 的前體物質攝入減少, 則往往伴隨有酪氨酸羥化酶活性或多巴胺脫羥酸活性降低, 表現為老齡小鼠腦內的NE、DA 含量下降。本實驗結果表明龜齡集有明顯提高NE、DA 含量, 提示其有顯著的抗衰老作用。有報道龜齡集有防止大鼠小腦皮質突觸素丟失的作用, 這與我們的研究結果基本一致。至于其作用機致是增加NE、DA 單胺遞質的重攝取, 還是影響遞質合成酶或分解酶的活性, 則有待進一步研究。

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