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                    驅(qū)白巴布期膠囊治療豚鼠實驗性白癜風(fēng)作用研究
    
                
    
                    
    來源： 百濟(jì)藥房藥訊     作者：百濟(jì)動態(tài)   瀏覽：    發(fā)布時間：2012-12-31 10:32:00
    
                
    
                
    
                
                
    
                    
    
                    
    
                    
    
                        
    
                        
                        
    
                        
      
                        
    
                    
    
                     
    [摘要] 目的 觀察驅(qū)白巴布期膠囊對豚鼠實驗性白癜風(fēng)的療效。方法 采用氫醌化學(xué)脫色法制造豚鼠實驗性白癜風(fēng)模型，將模型豚鼠給予不同劑量的驅(qū)白巴布期膠囊。治療結(jié)束后，采用多巴和鐵染色觀察黑素細(xì)胞及黑色顆粒的變化，免疫組織化學(xué)切片法觀察酪氨酸酶含量變化。結(jié)果 實驗后各劑量驅(qū)白巴布期膠囊給藥組及預(yù)防組黑素細(xì)胞計數(shù)與模型組比較，明顯升高(P＜0.01)，基底含黑素顆粒細(xì)胞計數(shù)與模型組比較也顯著提高(P＜0.01)；酪氨酸酶表達(dá)與模型組比較也顯著升高(P＜0.01)。結(jié)論驅(qū)白巴布期膠囊可提高白癜風(fēng)動物模型表皮黑素細(xì)胞、基底含黑素顆粒細(xì)胞，同時可促進(jìn)白癜風(fēng)動物模型酪氨酸酶表達(dá)的增高。
    

    

    

        白癜風(fēng)是一種常見的皮膚疾病，其發(fā)病機(jī)制尚不清楚，存在自身免疫學(xué)說、黑素細(xì)胞自毀學(xué)說等假說。其中黑素細(xì)胞學(xué)說中的黑素減少是本病的表觀顯示指標(biāo)，可能與本病的發(fā)生有直接聯(lián)系，黑素細(xì)胞的生成過程又與酪氨酸酶直接相關(guān)。筆者在本實驗以維吾爾醫(yī)治療白癜風(fēng)的傳統(tǒng)復(fù)方驅(qū)白巴布期膠囊為研究對象，通過動物實驗考察其對實驗性白癜風(fēng)的作用，對其療效做初步判斷，為進(jìn)一步進(jìn)行驅(qū)白巴布期膠囊的作用機(jī)制探討做鋪墊。
    

     
    

        1 材料與方法
    

        1.1 材料
    

        1.1.1 受試藥物 驅(qū)白巴布期膠囊由補(bǔ)骨脂、驅(qū)蟲斑鳩菊、高良姜、白花丹、盒果藤等5昧藥材制成，由新疆華康藥業(yè)提供，批號：100140。常溫下保存，配制方法：溶解在5%羧甲基纖維素鈉水溶液中(劑量依據(jù)：人臨床劑量換算成豚鼠劑量，單位：mg·kg-1·d -1)。
    

    

    

        1.1.2 儀器 生物組織攤烤片機(jī)(KZPG-1A)，生物組織包埋機(jī)(BMG-1)，切片機(jī)(RM2235)，光學(xué)顯微鏡(LEICA DM2500)，恒溫水浴箱(上海亞榮生物儀器廠)。
    

    

    

        1.1.3 實驗動物 黑色豚鼠112只，體質(zhì)量(250±20)g，雌雄各半，由南方醫(yī)科大學(xué)實驗動物中心提供。
    

    

    

        1.1.4 主要試劑 白靈片(佛山馮了性藥業(yè)有限公司生產(chǎn)，批號：100702)，氫醌(天津市天新精細(xì)化工開發(fā)中心，批號：20100120)，Dopa一氧化酶(Sigma公司)，鼠抗人酪氨酸酶單克隆抗體(Sigma公司)，DAB-H2O2(Sigma公司)，Elvision試劑(Sigma公司)。
    

    

    

        1.2 實驗方法
    

        1.2.1 實驗分組 黑色豚鼠112只，隨機(jī)分為正常對照組、模型組、陽性藥物對照組(給予白靈片1128mg·kg-1·d -1)，低、中、高劑量給藥組(分別給予驅(qū)白巴布期膠囊580，1160，2320 mg·kg-1·d -1 )，自身恢復(fù)組，中劑量預(yù)防組(給予驅(qū)白巴布期膠囊1160 mg·kg-1·d -1)，每組雌雄各7只。
    

    

    

        1.2.2 白癜風(fēng)動物模型的建立 脫去各組豚鼠背部黑色毛5cm×5cm，除正常對照組外，其他7組采用5%氫醌對黑色豚鼠進(jìn)行皮膚脫色，正常對照組豚鼠每天涂抹等量0.9%氯化鈉溶液。連續(xù)涂抹30 d。在此期間，豚鼠每3 d在受試區(qū)脫毛1次。
    

    

    

        1.2.3 給藥方法 正常對照組、模型組、自身恢復(fù)組不做任何處理，中劑量預(yù)防組從造模開始時給藥，連續(xù)給藥觀察60 d。其余各組造模30 d后開始給藥，連續(xù)觀察給藥30 d。
    

    

    

        1.2.4 指標(biāo)檢測 治療結(jié)束后，肉眼觀察各組藥物治療豚鼠實驗性白癜風(fēng)的效果。于受試區(qū)中心取皮膚1cm×1cm，固定，石蠟包埋，切片后觀察黑素細(xì)胞，進(jìn)行Dopa一氧化酶染色和Lillie染色觀察豚鼠表皮黑素細(xì)胞(melanocytes，MC)、含黑素顆粒基底細(xì)胞、酪氨酸酶含量變化。
    

    

    

        1.3 酷氨酸酶強(qiáng)度判定標(biāo)準(zhǔn) 
    

        酪氨酸酶陽性產(chǎn)物定位于細(xì)胞質(zhì)內(nèi)，顯鏡下細(xì)胞內(nèi)出現(xiàn)黃色或棕黃色顆粒、或團(tuán)塊狀為陽性表達(dá)。采用二級計分法判定結(jié)果，陽性細(xì)胞計＜5%為0分；~25%為1分；~50% 為2分；~75% 為3分；＞75% 為4分。按染色強(qiáng)度分類：淡黃色1分；黃或深黃2分；褐或棕黃色3分。兩者相加＜2分為陰性(一)，2~3分為陽性(+)，4~5分為中等陽性(++)，6~7分為強(qiáng)陽性(+++)。
    

    

    

        1.4 統(tǒng)計學(xué)方法 用SPSS軟件對實驗結(jié)果進(jìn)行t檢驗統(tǒng)計學(xué)處理。組問計數(shù)資料比較均采用Wilcoxon秩和檢驗。P＜0.05表示差異有統(tǒng)計意義。
    

     
    

        2 結(jié)果
    

        2.1 驅(qū)白巴布期膠囊對皮膚黑色素的影響 
    

        肉眼觀察可見，用5%氫醌后，各氫醌脫色組動物受試區(qū)皮膚較正常對照組動物受試區(qū)皮膚明顯偏白。其中模型組皮膚顏色最淡，呈蒼白色，有白斑，黑毛變成黃毛，有的甚至長出白毛。中劑量預(yù)防組動物皮膚較其他氫醌脫色組動物受試區(qū)皮膚偏黑。自身恢復(fù)組動物皮膚，較其他氫醌脫色組動物受試區(qū)皮膚偏白。高、中、低劑量給藥組、陽性對照組受試區(qū)皮膚肉眼觀察無明顯差別。
    

    

    

        2.2 MC的觀察 Dopa-氧化酶染色后，棕黑色染色為黑素細(xì)胞陽性。分別于光鏡下測定每個高倍鏡視野內(nèi)各組MC數(shù)量，每個標(biāo)本觀察10個高倍鏡視野，計算每100個表皮基底細(xì)胞中MC的平均數(shù)量。 表l，圖1。
    

    

    

    

    

        2.3 含黑素顆粒的基底細(xì)胞計數(shù) Lillie染色后，黑色素呈暗綠色為陽性，分別于光鏡下測定各組含黑素顆粒的基底細(xì)胞數(shù)量，每個標(biāo)本觀察l0個島倍鏡視野，計算每100個表皮基底細(xì)胞中含黑素顆粒的基底細(xì)胞的平均數(shù)量。見表1，圖2。
    

    

    

        2.4 酪氨酸酶含量觀察 見圖3，表2。
    

    

    

    

        3 討論
    

        白癜風(fēng)是一種常見的色素障礙性皮膚病，臨床主要表現(xiàn)為黑色素減少或脫失。根據(jù)黑色素易受強(qiáng)氧化劑氫醌破壞的特點，參照文獻(xiàn)制備白癜風(fēng)動物模型的方法，選用性質(zhì)更為穩(wěn)定的5% 氫醌將豚鼠黑色皮膚脫色，連續(xù)30 d后，肉眼可見豚鼠皮膚呈蒼白色，有白斑，黑毛變成黃毛，有的甚至長出白毛。鏡下可見皮膚切片，棘層和毛囊內(nèi)黑色素減少，有的毛囊內(nèi)上中部黑色素完全脫失，而下部有少量黑素細(xì)胞，證明本實驗?zāi)Ｐ统晒Α?/div>

    

    

        在成功制備了白癜風(fēng)動物模型的基礎(chǔ)上，設(shè)置了自身恢復(fù)組、陽性對照組、中劑量預(yù)防組以及高、中、低劑量給藥組，通過連續(xù)30 d的治療，自身恢復(fù)組動物皮膚，較其他氫醌脫色組動物受試區(qū)皮膚偏白。
    

    

    

        高、中、低給藥劑量組、陽性對照藥物組受試區(qū)皮膚肉眼觀察無明顯區(qū)別。在組織學(xué)檢查中，給藥組表皮黑素分布及含黑素毛囊數(shù)明顯多于模型組（P＜0.01），通過免疫組化結(jié)果，可發(fā)現(xiàn)，酪氨酸酶含量也明顯高于模型組（P＜0.01），表明驅(qū)白巴布期膠囊在治療實驗性白癜風(fēng)上的確是有效的。
    

    

    

        在黑素細(xì)胞的黑素生物合成過程中，酪氨酸酶是黑素合成的關(guān)鍵酶，其活性決定著黑素合成的速度和產(chǎn)量。酪氨酸酶的表達(dá)定位于表皮基底部黑素細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)，為黃或棕黃色顆粒，呈局灶性或彌漫性分布。本試驗顯示與模型組動物受試區(qū)皮膚相比，高、中、低劑量給藥組酪氨酸酶表達(dá)量明顯增加，預(yù)防給藥組動物皮膚受試區(qū)酪氨酸酶的表達(dá)含量同樣高于模型組，說明驅(qū)白巴布膠囊對酪氨酸酶的表達(dá)有促進(jìn)作用。用治療白癜風(fēng)。驅(qū)白巴布期膠囊可能是通過對酪氨酸酶表達(dá)的上調(diào)作驅(qū)白巴布期膠囊中所含的主藥為補(bǔ)骨脂和驅(qū)蟲斑鳩菊，補(bǔ)骨脂有致光敏作用，內(nèi)服或者局部使用，使皮膚對紫外線照射敏感，容易出現(xiàn)色素沉著。補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素促使皮膚黑色素的合成，并使之沉積于皮下，臨床上利用此作用來治療白癜風(fēng)。現(xiàn)代藥理學(xué)研究表明，驅(qū)蟲斑鳩菊治療白癜風(fēng)的作用機(jī)制是多方面的，可通過多途徑、多靶點發(fā)揮作用。本實驗研究為臨床治療白癜風(fēng)提供了一定的理論根據(jù)。（參考來源：彭英, 霍仕霞, 康雨彤.驅(qū)白巴布期膠囊治療豚鼠實驗性白癜風(fēng)作用研究[J]醫(yī)藥導(dǎo)報2011年7月第30卷第7期 P861-864）
    

     
    

     
    

     
    
                    
                   
                     
    
                    
    
                     
    
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                        TAG：驅(qū)白巴布期片 
    
                
    
                
    
                    
    
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