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攜帶IFN-5α基因的HBV DNA質(zhì)粒構(gòu)建及其表達(dá)
- 來(lái)源： 新特藥房藥訊 作者：新特藥房 瀏覽： 發(fā)布時(shí)間：2005/9/22 10:11:00
| （上海）為了構(gòu)建攜帶人IFN-5α基因的X基因缺陷的HBV DNA真核表達(dá)質(zhì)粒，并在真核細(xì)胞中表達(dá)，研究者在pBR322-B-HBV質(zhì)粒(含adrⅠ型HBV DNA)中插入人工合成片段破壞其HBV-X基因區(qū)，再與IFN-5α片段連接，最后克隆人真核表達(dá)載體pcDNA3，獲得攜帶人IFN-5α基因的X基因缺陷的HBV DNA真核表達(dá)質(zhì)粒pcDNA3-KN-F1F2-IFN-5α。同時(shí)構(gòu)建兩組對(duì)照質(zhì)粒，即連接完整HBV DNA的真核表達(dá)質(zhì)粒和連接X(jué)基因缺陷的HBV DNA真核表達(dá)質(zhì)粒，將上述3種質(zhì)粒以脂質(zhì)體法同時(shí)轉(zhuǎn)染HepG2細(xì)胞，G418篩選出穩(wěn)定表達(dá)系統(tǒng)后選用熒光定量PCR法、ELISA法、RT-PCR法檢測(cè)3種包裝病毒的復(fù)制表達(dá)以及IFN-5α的表達(dá)水平。結(jié)果獲得目的真核表達(dá)質(zhì)粒pcDNA3-KN-F1F2-IFN-5α；目的質(zhì)粒轉(zhuǎn)染HepG2細(xì)胞后其包裝病毒的復(fù)制表達(dá)水平均較兩個(gè)對(duì)照組降低；插入的IFN-5α片段可以在mRNA以及蛋白質(zhì)水平表達(dá)。可見(jiàn)成功構(gòu)建攜帶人IFN-5α基因的X基因缺陷的HBV DNA真核表達(dá)質(zhì)粒，并能在HepG2真核細(xì)胞中表達(dá)。 |
TAG：IFN-5α HBV DNA
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