答:研究人員通過(guò)對(duì)照組說(shuō)明鶴蟾片治療肺癌的藥理作用機(jī)制。
研究顯示鶴蟾片含藥血清處理后,LAC細(xì)胞呈現(xiàn)一系列凋亡特征改變。揭示鶴蟾片可抑制LAC腫瘤細(xì)胞增殖,對(duì)細(xì)胞凋亡具有一定的促進(jìn)作用。抑制腫瘤細(xì)胞增殖,誘導(dǎo)其分化,最終使其發(fā)生凋亡,是鶴蟾片抗腫瘤作用的主要機(jī)制。
研究中經(jīng)鶴蟾片含藥血清作用后的LAC細(xì)胞,倒置相差顯微鏡下見細(xì)胞體積縮小,核裂解,細(xì)胞貼壁能力下降;經(jīng)AO染色,熒光顯微鏡下細(xì)胞核呈致密濃染的塊狀或顆粒狀橘黃色熒光,較之對(duì)照組有明顯的差異。流式細(xì)胞儀可定量分析細(xì)胞的凋亡情況,研究表明細(xì)胞DNA斷裂是漸進(jìn)的過(guò)程,首先斷裂成大片段,然后逐漸生成小片段,初期形成的大片段不易從細(xì)胞內(nèi)溢出。
細(xì)胞周期分析只顯示AP峰處于G0-G1期發(fā)生凋亡的細(xì)胞,TUNEL法更全面地反映了整個(gè)細(xì)胞群的凋亡發(fā)生情況,鶴蟾片檢測(cè)陽(yáng)性標(biāo)記率顯著高于細(xì)胞周期分析AP峰,這是由于處于S期、G2-M期的細(xì)胞,其DNA含量高于G0-G1期細(xì)胞,即使DNA溢出,也不一定進(jìn)入亞G2期,再則早期凋亡細(xì)胞盡管DNA斷裂點(diǎn)增加,TUNEL分析陽(yáng)性,但其DNA含量并未顯著低于正常兩倍體細(xì)胞。
細(xì)胞凋亡中,染色體DNA雙鏈斷裂或單鏈斷裂而產(chǎn)生大量的粘性3’-OH末端,可在脫氧核糖核苷酸末端轉(zhuǎn)移酶(TdT)的作用下,將脫氧核糖核苷酸和熒光素、過(guò)氧化物酶、堿性磷酸酶或生物素形成的衍生物標(biāo)記到DNA的3’一末端,從而可進(jìn)行凋亡細(xì)胞的TUNEL法檢測(cè)。經(jīng)鶴蟾片含藥血清處理的LAC腫瘤細(xì)胞,細(xì)胞周期分析凋亡(AP)比例為5.6%,TUNEL法檢測(cè)凋亡陽(yáng)性率為12.3%,TUNEL分析結(jié)果明顯高于DNA細(xì)胞周期分析結(jié)果。