高效液相色譜法測定復明膠囊大黃酚含量研究

    復明膠囊系由中華人民共和國衛生部藥品標準的《中藥成方制劑》第12冊收載的復明片改變劑型而成，其標準編號為WS3一B一2385—97。復明膠囊由羚羊角、蒺藜、木賊、菊花、車前子、夏枯草、決明子、人參、山茱萸(制)、石斛、枸杞子、菟絲子、女貞子、石決明、黃連、谷精草、木通、熟地黃、山藥、澤瀉、茯苓、牡丹皮、地黃、檳榔二十四味藥組成，具有滋補肝腎，養陰生津，清肝明目的功效。復明膠囊用于青光眼，初、中期白內障及肝腎陰虛引起的羞明畏光、視物模糊等病。 

    復明膠囊處方藥味較多，為保證制劑質量，本文用高效液相色譜法對復明膠囊中所含的決明子活性成分大黃酚進行含量測定，以期找到穩定可靠含量測定方法。 

    儀器與試液：高效液相色譜儀：島津LC一10AD型高效液相色譜儀，SPD一10AVP型紫外檢測器，LC一10Atvp型泵，C18(5txm，250 mm×4．6 mm)色譜柱。大黃酚對照品(批號：110796—200311，含量測定用，購自中國藥品生物制品檢定所)。甲醇、乙腈為HPLC級試劑(美國TEDIA公司)；水為超純水；其余試劑為分析純(西安化學試劑廠)。復明膠囊由陜西康惠制藥有限公司提供。 

    實驗方法：色譜條件用反相高效液相色法測定大黃酚含量的方法較為成熟，本標準參考有關文獻，經試驗后確定如下方法：色譜柱：c18柱(5 m，250 nlnl×4．6 lnln ID)；流動相：乙腈一水一冰醋酸(70：30：1)為流動相；檢測波長為429 nm；柱溫為室溫；流速為1 mL／min；進樣量：20 IxL。 

    測定波長的選擇精密稱定大黃酚對照品適量，加無水乙醇一乙酸乙酯(2：1)制成每1 mL含12．5 g的溶液，以紫外分光光度法進行掃描，測試波長范圍為350～500 nm，實際的測定結果：430 am波長處為最大吸收波長，故將測定波長定為429 nm。 

    供試品溶液的制備取本品內容物適量，研細，取約2 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50 mL，稱定重量，置水浴加熱回流提取30 min，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取續濾液25 mL，蒸干，加10％鹽酸30 mL，置水浴中加熱水解1 h，立即冷卻，用三氯甲烷振搖提取4次，每次30 mL，合并三氯甲烷，回收溶劑至干，殘渣加無水乙醇一乙酸乙酯(2：1)溶解，并轉移至10 mL量瓶中，并稀釋至刻度，搖勻，用微孔濾膜濾過(0．45 m)取續濾液，即得。 

    陰性干擾試驗按復明膠囊生產工藝制法制 24 h內穩定。備不含決明子的樣品，此樣品按上述供試品溶液制重復性試驗按擬定的含量測定方法，對同法制備陰性對照品溶液，照樣品測定法，精密吸取 一批樣品(批號070801)分別制備5份供試品溶液，10 L注入液相色譜儀，結果在與對照品色譜峰相 測定大黃酚的含量。結果表明，用此方法測定制劑同的保留時間處無色譜峰出現，表明陰性對照無大 中大黃酚含量重復性良好。
黃酚的吸收峰，無干擾現象。 

    精密度試驗精密吸取供試品溶液(批號 黃酚對照溶液5 mL、5 mL、5 mL、10 mL、10 mL、070801)，按擬定的色譜條件測定，重復進樣5次， 10 mL，分別置具塞錐形角瓶中，揮干溶劑，再分別大黃酚峰面積的RSD=0．98％。結果證明，精密度 加入已知大黃酚含量的制劑(批號070801)，按上述良好。 樣品制備方法和色譜條件制備加樣回收供試品溶穩定性試驗取供試液(批號070801)分別在 液，并注入高效液相色譜儀，以下列公式計算回收0 h、4 h、8 h、12 h、24 h進樣，結果表明供試品溶液在率，。 

    本品十批復明膠囊樣品，平均含量0．04568 ms／粒，0．04568×巧％ =0•0343 g／粒，所以將復明膠囊含量最低限度定為0．03 mS／粒。 

    實驗研究采用甲醇為溶劑，加熱回流提取30，取續濾液一定量蒸干，加10％鹽酸置水浴中加熱水解1 h，再用三氯甲烷振搖提取4次，每次30 mL，合并三氯甲烷，回收溶劑至于，殘渣加無水乙醇一乙酸乙酯(2：1)溶解等處理樣品，能夠有效提取大黃酚，其精密度、穩定性、重復性、加樣回收率等試驗結果均良好，空白干擾試驗無干擾，表明復明膠囊質量標準較為完備，可控性強，含量專屬性強、靈敏度高。 

    根據大黃酚無水乙醇一乙酸乙酯(2：1)溶液的紫外吸收特征，最大吸收波長430 nm，參考中國藥典，選定429 am為測定波長，能夠達到基線分離，并且分離度較好。 

    (本文節選自《復明膠囊中大黃酚的含量測定研究》)

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