劉奇
224000 江蘇射陽縣陳洋中心衛(wèi)生院
(中國社區(qū)醫(yī)師·醫(yī)學(xué)專業(yè)2012年第22期(第14卷總第319期):300)
【摘要】目的:探討陰道分泌物常規(guī)檢查與PCR方法與效果。方法:收治細(xì)菌性陰道炎患者60例(觀察組),同期選擇健康成年婦女60年(對照組),取陰道分泌物后都進行常規(guī)培養(yǎng)鏡檢與PCR檢驗。結(jié)果:對照組的乳酸桿菌直接菌落計數(shù)平均1.62×107,觀察組的乳酸桿菌直接菌落計數(shù)平均1.25×104。同時PCR得灰度值與培養(yǎng)的茵數(shù)值之間明顯相關(guān)。結(jié)論:陰道分泌物常規(guī)檢查配合PCR檢查能夠有效發(fā)現(xiàn)疾病,方法特異、快速、簡便。
【關(guān)鍵詞】陰道分泌物;細(xì)菌性陰道炎;鏡檢PCR
陰道的正常微生物群在維持陰道的酸性環(huán)境,預(yù)防感染等方面起著非常重要的作用。常狀態(tài)下,陰道內(nèi)存在的多種微生物相互影響、相互制約,形成一個動態(tài)的平衡系統(tǒng),而乳酸桿菌是其中最重要、數(shù)量最多的菌群。近年來隨著分子生物學(xué)技術(shù)的發(fā)展及廣泛應(yīng)用,PCR方法在細(xì)菌定量方面的研究越來越多,與傳統(tǒng)方法相比在準(zhǔn)確性和速度上都有了很大的提高。本文為此具體探討了陰道分泌物常規(guī)檢查與PCR方法與效果。
資料與方法
2008年2月~2012年2月收治細(xì)菌性陰道炎患者60例(觀察組),年齡30~41歲,經(jīng)臨床及電鏡檢查確診為細(xì)菌性陰道炎;同期選擇健康成年婦女60例(對照組),年齡30~41歲。
常規(guī)檢測:用無菌棉拭子采集陰道分泌物后,快速放入無菌試管,將
PCR檢測:登陸GenBank,查找乳酸桿菌16sRNA的特異性序列,設(shè)計引物LbLMA正方向兩條引物,引物具有乳酸桿菌屬的特異性序列,該引物靶向16sRNA擴增約220bp。取處理好的乳酸桿菌純培養(yǎng)菌液2μL,加入23:1的PCR混合液中。
統(tǒng)計學(xué)處理:使用SPSS19.0統(tǒng)計軟件,P<0.05代表差異有顯著性。
結(jié)果
常規(guī)檢測結(jié)果:通過鏡檢,乳酸桿菌的菌落為圓形、隆起,周邊整齊光滑,無色、半透明。菌體呈革蘭陽性、無芽孢、細(xì)長有彎曲的桿菌,菌體可呈球桿狀或桿狀,排列成柵或鏈狀。對照組的乳酸桿菌直接菌落計數(shù)平均1.62×107,觀察組的乳酸桿菌直接菌落計數(shù)平均1.25×104。
PCR檢測結(jié)果:經(jīng)過PCR分析,對照組PCR檢測的平均灰度值856.2,觀察組46.2。同時PCR得灰度值與培養(yǎng)的菌數(shù)值之間明顯相關(guān)。
討論
陰道是人體的四大菌庫之一,細(xì)菌性陰道病時,表現(xiàn)為占優(yōu)勢的乳酸菌群被陰道加德納菌、厭氧菌和人型支原體等取代。乳酸桿菌是女性陰道的優(yōu)勢菌群,其發(fā)酵產(chǎn)酸是導(dǎo)致健康成年婦女陰道內(nèi)的pH值通常低于4.5的主要原因。健康婦女陰道內(nèi)可有一種或幾種乳酸桿菌,產(chǎn)生的過氧化氧,是正常陰道生態(tài)系統(tǒng)的一個非特異性的抗生保護劑。婦女陰道內(nèi)的乳酸桿菌對健康是非常有益的,而當(dāng)乳酸桿菌減少時,會造成菌群失調(diào),導(dǎo)致細(xì)菌性陰道炎的發(fā)生。因此,能夠快速地檢測陰道中乳酸桿菌的數(shù)量,對了解婦女陰道的微生態(tài)環(huán)境,指導(dǎo)臨床治療是至關(guān)重要的。
PCR技術(shù)的應(yīng)用,使得針對細(xì)菌鑒定及定量的研究發(fā)展到了基因水平。PCR法可檢測原位菌數(shù),通過設(shè)計屬特異性引物,能夠檢測到不能被培養(yǎng)的和已死的細(xì)菌,而不需要繁瑣的培養(yǎng)富集。本組試驗結(jié)果顯示,健康婦女陰道分泌物中的乳酸桿菌含量一般106~108,而細(xì)菌性陰道炎患者陰道分泌物中的乳酸桿菌含量明顯減少,含量一般<105。同時利用標(biāo)本灰度值計算所得的結(jié)果與培養(yǎng)計算的結(jié)果之間明顯相關(guān),并PCR法所得的灰度值與培養(yǎng)計算的結(jié)果之間也存在明顯相關(guān)性。
總之,陰道分泌物常規(guī)檢查配合PCR檢查能夠有效發(fā)現(xiàn)疾病,方法特異、快速、簡便,值得在檢驗中推廣應(yīng)用。